[发明专利]一种基于核酸质谱平台体细胞突变超敏检测方法

权利要求书

1.一种基于核酸质谱平台体细胞突变超敏检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

获取待检测基因；

对所述待检测基因执行序列分析操作，得到待测突变位点；

根据所述待测突变位点设计PCR扩增引物、SAP反应试剂、单碱基延伸阻遏引物和野生型阻遏探针；

通过所述PCR扩增引物对所述待检测基因执行扩增操作，得到PCR产物；

通过所述SAP反应试剂对所述PCR产物执行SAP反应操作，得到消化产物；

通过所述单碱基延伸阻遏引物对所述消化产物执行延伸反应操作，得到延伸产物；

对所述延伸产物执行点样操作，获得点样数据；

对所述点样数据进行分析，获得待检测基因突变类型。

2.根据权利要求1所述的基于核酸质谱平台体细胞突变超敏检测方法，其特征在于：

所述执行序列分析操作的步骤进一步包括：对所述待检测基因的区域DNA序列和氨基酸序列进行分析，获取待测突变位点序列信息，得到所述待测突变位点。

3.根据权利要求1所述的基于核酸质谱平台体细胞突变超敏检测方法，其特征在于：

所述PCR扩增引物包括第一PCR扩增引物1st-PCRP和第二PCR扩增引物2nd-PCRP。

4.根据权利要求3所述的基于核酸质谱平台体细胞突变超敏检测方法，其特征在于：

所述第一PCR扩增引物和所述第二PCR扩增引物中的正向引物或反向引物的5'末端增加通用序列ACGTTGGATG。

5.根据权利要求4所述的基于核酸质谱平台体细胞突变超敏检测方法，其特征在于：

所述执行扩增操作的步骤进一步包括：将所述待测突变位点的所述第一PCR扩增引物和所述第二PCR扩增引物进行混合，得到混合工作液，通过单一引物浓度为0.5μM-1μM对所述待检测基因的DNA进行扩增，得到所述PCR产物。

6.根据权利要求1所述的基于核酸质谱平台体细胞突变超敏检测方法，其特征在于：

所述执行SAP反应操作的步骤进一步包括：将执行扩增操作后的反应体系与所述SAP反应试剂进行混合，消除所述反应体系中剩余的引物和dNTP，得到所述消化产物。

7.根据权利要求1所述的基于核酸质谱平台体细胞突变超敏检测方法，其特征在于：

所述执行延伸反应操作的步骤进一步包括：将所述消化产物与所述单碱基延伸阻遏引物进行混合，得到所述延伸产物；

8.根据权利要求1所述的基于核酸质谱平台体细胞突变超敏检测方法，其特征在于：

所述野生型阻遏探针的5'末端用5`C3 Spacer或者5`P修饰，3'末端3`MGB修饰，熔点温度值范围65℃~72℃。