[发明专利]一种获得两种夏天无多糖的提取方法、两种夏天无多糖及其应用

说明书

本发明属于医药技术领域，特别是涉及一种获得两种夏天无多糖的提取方法、两种夏天无多糖及其应用。本发明提供了一种获得两种夏天无多糖的提取方法，所述提取方法包括粗提、醇沉、酶解和柱层析，经过上述提取方法能够分别获得夏天无多糖CPS1和夏天无多糖CPW2。本发明提供的提取方法通过一套方法准确地获得两种产物，能够有效提高夏天无多糖的提取效率。本发明提供的两种夏天无多糖具有显著的抗炎效果。夏天无多糖CPS1能显著降低LPS诱导的RAW264.7细胞中的TNF‑α，IL‑1β，IL‑6和COX‑2四种炎症因子的mRNA相对表达量；夏天无多糖CPW2则能显著降低TNF‑α，COX‑2和iNOS基因的表达量。

技术领域

本发明属于医药技术领域，特别是涉及一种获得两种夏天无多糖的提取方法、两种夏天无多糖及其应用。

背景技术

夏天无为罂粟科植物伏生紫堇(Corydalis decumbens)的干燥块茎。其性苦、微辛，常用于治疗头痛、卒中偏瘫、腰腿疼痛。现代药理学研究显示，夏天无具有抗炎、抗脑梗死、抗心律失常和保护脑神经等作用。目前，对于夏天无活性成分的研究主要集中在生物碱类物质，如原阿片碱、延胡索乙素和巴马汀等，现阶段对夏天无含有的多糖的研究较少，难以高效的提取获得夏天无中含有的多糖，并对其进行深入的研究。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种获得两种夏天无多糖的提取方法、两种夏天无多糖及其应用。本发明提供的提取方法能够利用一套提取方法高效地提取获得两种不同的夏天无多糖(夏天无多糖CPS1和夏天无多糖CPW2)。这两种夏天无多糖具有显著的抗炎作用。

为了实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：

本发明提供了一种获得两种夏天无多糖的提取方法，所述提取方法包括以下步骤：

将夏天无与水混合进行水提得到水提液，浓缩水提液得到浓缩液；

所述浓缩液浓缩至水提液的体积的1/25～1/35；

将无水乙醇和所述浓缩液混合，进行离心，取沉淀得到第一粗提取物；所述无水乙醇和所述浓缩液的体积比为2:1；

将无水乙醇和所述离心的上清液混合，进行离心，取沉淀得到第二粗提物；所述无水乙醇和所述离心的上清液混合的体积比为(0.7～1):1；

将胰蛋白酶和所述第一粗提物混合，进行酶解，得到酶解液，使用装有DEAE-Sepharose CL-6B凝胶的层析柱对所述酶解液进行第一洗脱得到第一洗脱液，对所述第一洗脱液进行纯化得到夏天无多糖CPS1；

所述第一洗脱包括以下步骤：利用蒸馏水洗脱，不收集洗脱液，蒸馏水洗脱结束后，以0.25mol/L～0.45mol/L的NaCl水溶液进行线性梯度洗脱，得到第一洗脱液；

使用装有DEAE-Sepharose CL-6B凝胶的层析柱对所述第二粗提物进行第二洗脱得到第二洗脱液，对所述第二洗脱液进行纯化，得到夏天无多糖CPW2；

所述第二洗脱包括以下步骤：利用蒸馏水洗脱，得到第二洗脱液。

优选的，所述水提时，夏天无与水的质量比为1:(10～100)。

优选的，所述第一洗脱和第二洗脱时流速分别为0.8mL/min。

优选的，所述胰蛋白酶与第一粗提物中蛋白质的质量比为1:(15～20)。

优选的，所述酶解的温度为37℃，酶解的时间为20h。

本发明还提供了一种根据上述提取方法提取获得的夏天无多糖CPS1，所述夏天无多糖CPS1为均一杂多糖，分子量为360kDa，由葡萄糖，半乳糖，甘露糖和阿拉伯糖组成；

所述葡萄糖，半乳糖，甘露糖和阿拉伯糖组成的摩尔比为4.9:2.0:1:1.9。