[发明专利]一种结合抗体的生物传感检测方法及检测系统

权利要求书

1.一种结合抗体的生物传感检测方法，其特征在于，包括：

(1)制备光纤探针：

将生物素化的抗原固定至链霉亲和素芯片表面，得到光纤探针，所述生物素化的抗原包括生物素化的新冠病毒核心蛋白；

(2)获得参照样本和待测样本：

获得待测者的血清或干血斑全血，稀释后，作为待测样本；

获得健康者的血清或干血斑全血若干份，稀释后，分别添加参照抗体嵌合式抗RBD单克隆抗体，得到不同抗体浓度的若干个参照样本；

(3)样本捕获、抗体检测和信号放大：

对所述不同抗体浓度的若干个参照样本分别进行如下样本捕获、抗体检测和信号放大，得到若干个参照样本的光谱位移，具体为：

样本捕获：使所述光纤探针与所述参照样本接触，所述光纤探针上的抗原特异性捕获所述参照样本中存在的针对所述抗原的结合抗体；抗体检测：使所述光纤探针与HRP偶联的鼠抗人IgG抗体接触，所述光纤探针上捕获的结合抗体与所述鼠抗人IgG抗体特异性结合；信号放大：使所述光纤探针与信号放大剂DAB接触，所述光纤探针上的HRP与所述DAB高亲和力结合，产生金属沉淀，得到参照样本的光谱位移；

对所述待测样本进行如下样本捕获、抗体检测和信号放大，得到待测样本的光谱位移，具体为：

样本捕获：使所述光纤探针与所述待测样本接触，所述光纤探针上的抗原特异性捕获所述待测样本中存在的针对所述抗原的结合抗体；抗体检测：使所述光纤探针与HRP偶联的鼠抗人IgG抗体接触，所述光纤探针上捕获的结合抗体与所述鼠抗人IgG抗体特异性结合；信号放大：使所述光纤探针与信号放大剂DAB接触，所述光纤探针上的HRP与所述DAB高亲和力结合，产生金属沉淀，得到待测样本的光谱位移；

(4)建立标准曲线：

基于所述若干个参照样本的抗体浓度和光谱位移，以参照样本中的抗体浓度为X轴，以参照样本的光谱相对位移为Y轴，建立结合抗体“浓度-相对位移”标准曲线，其中，

参照样本的光谱相对位移＝参照样本的光谱位移–零抗体浓度的参照样本的光谱位移；

(5)获得待测样本的结合抗体浓度：

根据所述结合抗体“浓度-相对位移”标准曲线以及待测样本的光谱相对位移，获得待测样本的结合抗体浓度，其中，

待测样本的光谱相对位移＝待测样本的光谱位移–零抗体浓度的参照样本的光谱位移。

2.根据权利要求1所述的结合抗体的生物传感检测方法，其特征在于，还包括：

第一次洗脱：在制备光纤探针之后，洗脱未固定至链霉亲和素芯片表面的抗原；

第二次洗脱：在样本捕获之后，洗脱未被光纤探针特异性捕获的结合抗体；

第三次洗脱：在抗体检测之后，洗脱未与结合抗体结合的HRP偶联的鼠抗人IgG抗体。

3.根据权利要求1所述的结合抗体的生物传感检测方法，其特征在于：

所述生物素化的新冠病毒核心蛋白包括生物素化的RBD蛋白、生物素化的S-ECD蛋白或生物素化的RBD-N501Y蛋白；

所述结合抗体包括RBD蛋白所产生的结合抗体、S-ECD蛋白所产生的结合抗体或RBD-N501Y蛋白所产生的结合抗体。

4.根据权利要求1所述的结合抗体的生物传感检测方法，其特征在于，对所述待测者或健康者的血清或干血斑全血样本进行的稀释，为稀释至80～120倍。

5.根据权利要求1所述的结合抗体的生物传感检测方法，其特征在于，所述参照样本和/或待测样本的光谱位移在15～25nm范围内。

6.根据权利要求5所述的结合抗体的生物传感检测方法，其特征在于，所述HRP偶联的鼠抗人IgG抗体的浓度为0.067μg/mL～0.4μg/mL。

7.根据权利要求5所述的结合抗体的生物传感检测方法，其特征在于，所述信号放大剂DAB与所述光纤探针接触前进行200倍稀释～33.3倍稀释：

所述200倍稀释为：5μL DAB添加至1mL的DAB底物缓冲液中；

所述33.3倍稀释为：30μL DAB添加至1mL的DAB底物缓冲液中。