[发明专利]一种免疫调节性γδT细胞及其体外扩增方法

权利要求书

1.一种扩增Reg-γδT细胞的方法，包括如下步骤：

（1）向培养基中加入PBMCs、BMP2、唑来膦酸、IL-2和IL-15，得到培养体系；之后培养2-4天；培养体系中PBMCs的浓度为3×10⁶个/mL—5×10⁶个/mL，BMP2的浓度为50-100ng/mL，唑来膦酸的浓度为1.5-3μmol/mL，IL-2的浓度为20-50ng/mL，IL-15的浓度为40-60ng/mL；

（2）完成步骤（1）后，半量换液，培养2-4天；

（3）完成步骤（2）后，半量换液，培养2-4天；收集体系中的Reg-γδT细胞；

Reg-γδT细胞与γδT细胞的唯一不同在于前者的免疫表型为CD3⁺Vδ2⁺CD25⁺CD127^-。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（1）中，培养基的溶质及其浓度为8-12%胎牛血清、0.8-1.2%青霉素和0.8-1.2%链霉素，溶剂为RPMI1640完全培养基。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（2）和所述步骤（3）中，半量换液的操作方法为：去除一半培养液，再加入一半含BMP2、IL-2和IL-15的培养基并使体系中BMP2的浓度为50-100ng/mL，IL-2的浓度为20-50ng/mL，IL-15的浓度为40-60ng/mL。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述培养基的溶质及其浓度为8-12%胎牛血清、0.8-1.2%青霉素和0.8-1.2%链霉素，溶剂为RPMI1640完全培养基。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述培养2-4天为培养3天。

6.Reg-γδT细胞，其特征在于：采用权利要求1至5任一所述的方法制备获得；所述Reg-γδT细胞与γδT细胞的唯一不同在于前者的免疫表型为CD3⁺Vδ2⁺CD25⁺CD127^-。

7.用于扩增Reg-γδT细胞的试剂盒，为试剂盒甲或试剂盒乙；Reg-γδT细胞与γδT细胞的唯一不同在于前者的免疫表型为CD3⁺Vδ2⁺CD25⁺CD127^-；

所述试剂盒甲由PBMCs、BMP2、唑来膦酸、IL-2和IL-15组成；

所述试剂盒乙由培养基、PBMCs、BMP2、唑来膦酸、IL-2和IL-15组成；

所述培养基的溶质及其浓度为8-12%胎牛血清、0.8-1.2%青霉素和0.8-1.2%链霉素，溶剂为RPMI1640完全培养基。

8.权利要求6所述Reg-γδT细胞的应用，为A1）-A7）中的至少一种；

A1）抑制PBMC细胞；

A2）减弱CD4细胞和/或CD8细胞的活化；

A3）降低炎症因子分泌；

A4）抑制效应性Vδ2⁺T细胞；

A5）降低效应性Vδ2⁺T细胞的杀伤性受体表达；

A6）降低效应性Vδ2⁺T细胞炎症因子分泌；

A7）有效抑制效应性Vδ2⁺T细胞的抗肿瘤作用；

所述应用用于非疾病的诊断与治疗。

9.权利要求6所述Reg-γδT细胞在抑制效应性T细胞中的应用；

所述应用用于非疾病的诊断与治疗。