[发明专利]一种低分子量鲟鱼软骨多糖及其制备方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种低分子量鲟鱼软骨多糖及其制备方法。本发明提供的低分子量鲟鱼软骨多糖的制备方法包括：将鲟鱼软骨经第一次酶解得到分子量大于10000Da的高分子量软骨多糖，将所述高分子量软骨多糖经过氧化氢溶液处理后，再经第二次酶解得到分子量小于5000Da的低分子量软骨多糖，所述第一次酶解使用的酶为硫酸软骨素专用提取酶，所述第二次酶解使用的酶为硫酸软骨素AC酶。该方法能够有效降低鲟鱼软骨多糖的分子量，同时显著提高其中具有抗结直肠肿瘤活性的软骨多糖的含量，制备得到的产物具有较高的抑制结直肠肿瘤细胞增殖的活性，且对于正常细胞没有毒性作用，具有开发抗肿瘤产品的潜力。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种低分子量鲟鱼软骨多糖及其制备方法。

背景技术

软骨多糖(Cartilage polysaccharide，CP)是一种天然酸性黏多糖，通常与蛋白质结合在一起以糖胺聚糖的形式存在。软骨多糖的基本组成单位是D-葡萄糖醛酸和N-乙酰-D-氨基半乳糖通过β-1,3糖苷键连接而成的二糖。

鲟鱼是现存起源最早的脊椎动物之一。鲟鱼全身遍布软骨，鲟鱼的头、脊索、鳍中软骨约占鱼体20％，从鲟鱼软骨中提取的软骨多糖具有调节机体免疫、抗关节炎、抗凝血、调脂降脂、抗动脉粥样硬化和神经元保护和修复作用，在医药、化妆品和食品工业中具有广泛的用途。目前报道的鲟鱼软骨多糖中较少涉及抗肿瘤活性的产品，对特定肿瘤细胞具有较高抑制活性的产品的报道更是甚少。

发明内容

本发明的目的是提供一种低分子量鲟鱼软骨多糖的制备方法。本发明的另一目的是提供该制备方法得到的低分子量软骨多糖，该软骨多糖具有较高的抑制结直肠肿瘤细胞增殖的活性。

本发明以具有抑制结直肠肿瘤细胞增殖活性的低分子量软骨多糖的开发为目的，提供具有特定功能的软骨多糖的制备方法。

具体地，本发明提供以下技术方案：

本发明提供一种低分子量鲟鱼软骨多糖的制备方法，包括：

将鲟鱼软骨经第一次酶解得到分子量大于10000Da的高分子量软骨多糖，

将所述高分子量软骨多糖经过氧化氢溶液处理后，再经第二次酶解得到分子量小于5000Da的低分子量软骨多糖，

其中，所述第一次酶解使用的酶为硫酸软骨素专用提取酶，所述第二次酶解使用的酶为硫酸软骨素AC酶。

本发明在研发过程中发现，酶解产物对结直肠肿瘤细胞的抑制率与酶解效率并不呈现正相关的关系，小分子的糖越多，分子量越低并不代表对结直肠肿瘤细胞的抑制活性越强。将鲟鱼软骨经硫酸软骨素专用提取酶酶解后，先利用过氧化氢处理，再进行硫酸软骨素AC酶酶解，不仅能够降低鲟鱼软骨多糖的分子量，而且能够显著提高制备得到的鲟鱼软骨多糖中具有抑制结直肠肿瘤细胞增殖活性的低分子量软骨多糖的含量，提高其对于结直肠肿瘤细胞增殖的抑制活性。

优选地，所述过氧化氢溶液的浓度为2-4％。

进一步优选地，所述过氧化氢溶液处理为：将所述高分子量的软骨多糖按照质量体积比g：ml为(1-3)：10与所述过氧化氢溶液混合，于32-37℃处理1-2h，再于65-75℃加热处理8-12min。

在过氧化氢溶液处理后进行第二次酶解，其中，硫酸软骨素AC酶的用量为0.05-0.15IU/mg底物。

优选地，经过氧化氢溶液处理后，将底物溶液浓度调整为0.5-2mg/mL后，再进行第二次酶解。

优选地，第二次酶解的酶解条件为：pH5-7、34-38℃条件下酶解80-90min。