[发明专利]一种丹膝颗粒的指纹图谱的建立方法

说明书

本发明提出了丹膝颗粒的HPLC‑DAD‑ELSD指纹图谱的建立方法，包括供试品的制备、色谱条件的确定，使用HPLC‑DAD‑ELSD进行测定，得到丹膝颗粒的HPLC‑DAD‑ELSD指纹图谱，全面准确的表达了丹膝颗粒的化学信息，该指纹图谱的共有峰的分离度及峰型较好、重复性好、可操作性强等特点，能够有效地控制丹膝颗粒的质量。

技术领域

本发明涉及中药制剂质量控制领域，具体涉及一种丹膝颗粒HPLC-DAD-ELSD指纹图谱的建立方法。

背景技术

丹膝颗粒质量标准收载于《中国药典》2020年版一部，丹膝颗粒原名“偏瘫灵颗粒”，为九芝堂股份有限公司独家生产品种，全方由丹参、牛膝、天麻、牡丹皮、赤芍、川芎、生地黄、淫羊藿、桑寄生、栀子、决明子、火麻仁12味药材组成，具有养阴平肝，熄风通络，清热除烦的功效，丹膝颗粒复方制剂基于整体观和辨证论治，临床上对阴虚风动型和气虚血淤型中风偏瘫有其特有的预防和治疗优势，临床数据表明其能缓解脑水肿,促进颅内血肿吸收,抗血栓形成,以及改善血液流变学，能明显改善患者神经功能,促进颅内血肿吸收,降低致残率。处方中以丹参、牛膝为君药，活血祛瘀，通经止痛，补肝肾强筋骨；赤芍、生地、牡丹皮清热凉血、养阴生津、散瘀止痛，共为臣药；淫羊藿、桑寄生、天麻、川芎、栀子共为佐药，增强君药补肝肾强筋骨、活血通经、清热除烦的作用，方中决明子、火麻仁清肝明目，润肠通便。

丹膝颗粒质量标准建立了丹参、牛膝、淫羊藿、栀子、决明子的薄层色谱鉴别和丹酚酸B、天麻素的高效液相含量测定方法，薄层色谱和含量测定项目多而且前处理方法繁杂，影响因素较多；也有文献报道高效液相色谱法同时测定丹膝颗粒中8种成分含量，但难以形成对丹膝颗粒整体质量控制和评价。目前尚没有文献报道有关丹膝颗粒指纹图谱的研究，本发明通过高效液相色谱法，建立丹膝颗粒HPLC-DAD-ELSD指纹图谱，并通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统对其进行分析，为丹膝颗粒复方制剂整体质量控制提供依据，具有重要的意义。

发明内容

为了解决上述的技术问题，本发明提供一种丹膝颗粒HPLC-DAD-ELSD指纹图谱的建立方法，以及由此方法所得到的指纹图谱。该指纹图谱可以全面的体现丹膝颗粒HPLC-DAD-ELSD指纹图谱颗粒的整体化学信息，可用于评价和控制丹膝颗粒的质量，确保丹膝颗粒的稳定性、安全性和有效性。

本发明提供一种丹膝颗粒HPLC-DAD-ELSD指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：

(1)对照品溶液的制备：

精密称取没食子酸、栀子苷、丹酚酸B、淫羊藿苷、丹皮酚、丹参酮ⅡA对照品适量，至棕色量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成对照品溶液1；精密称取丹参素、芍药苷、人参皂苷Ro、橙黄决明素对照品适量，至棕色量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成对照品溶液2；

(2)供试品溶液的制备：

取丹膝颗粒，研细，取粉末，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇，超声提取40-50分钟，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

(3)HPLC-DAD-ELSD串联检测：

分别吸取步骤(1)(2)所得的对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪中，DAD和ELSD双通道串联测定，记录色谱图；其中，色谱条件为：C₁₈反相色谱柱，流动相A：乙腈，流动相B为0.05-0.1％甲酸水溶液；流速：0.8-1.0mL/min，柱温30-35℃，进样量10μl，分析时间135min，DAD 240-260nm检测；ELSD条件：漂移管温度40-55℃，气体流量1.5L/min，增益8-10；采用下述梯度洗脱方式洗脱：

(4)HPLC-DAD-ELSD指纹图谱的建立