[发明专利]用于在植物中增强基因表达的调节性核酸分子

权利要求书

1.用于增强自植物启动子的表达的方法，包括将一个或多个核酸表达增强性核酸(NEENA)分子功能性连接到启动子上，其中所述核酸表达增强性核酸对该启动子而言为异源的且包含：

i)具有SEQ ID NO:16至21中任一序列的核酸分子；或

ii)具有与SEQ ID NO:16至21中任一序列至少90％同一性的序列的核酸分子，其具有与SEQ ID NO:16至21中任一序列的相应核酸分子一样的表达增强活性；或

iii)在严格条件下与具有SEQ ID NO:16至21中任一序列的核酸分子杂交的核酸分子；或

iv)i)至iii)的核酸分子的30个或更多个连续碱基的片段，其具有与SEQ ID NO:16至21中任一序列的相应核酸分子一样的表达增强活性；或

v)与i)至iv)中所述的任何核酸分子互补或反向互补的核酸分子。

2.用于产生与相应的对照植物或其部分相比具有表达增强的一个或多个核酸分子的植物或其部分的方法，包括以下步骤：

a)将一个或多个包含权利要求1中i)至v)所定义的核酸分子的NEENA分子引入该植物或其部分；

和

b)使所述一个或多个NEENA分子功能性连接到启动子和在所述启动子控制下的核酸分子，其中该NEENA分子对所述启动子而言是异源的。

3.权利要求1或2的方法，其包括以下步骤：

a)将一个或多个包含权利要求1中i)至v)所定义的核酸分子的NEENA分子引入植物或其部分；和

b)使所述一个或多个NEENA分子整合到所述植物或其部分的基因组中，由此使所述一个或多个NEENA分子功能性连接到对所述一个或多个NEENA分子而言为异源的内源性启动子上；并可选地

c)从所述转化细胞再生包含所述一个或多个NEENA分子的植物或其部分。

4.权利要求3的方法，其中通过应用基因组编辑技术，使该一个或多个NEENA分子整合到植物或其部分的基因组中。

5.权利要求4的方法，其中该基因组编辑技术包括：使用核酸引导的核酸酶、TALEN、归巢内切核酸酶或锌指蛋白在该一个或多个NEENA分子待整合入基因组的位置处引入单链或双链断裂，并引入DNA修复模板，该模板包含该NEENA分子以及位于其3’末端和5’末端的序列，其中所述序列与所述单链或双链断裂的上游和下游序列基本相同或互补，以促进单链或双链断裂位置处的重组。

6.权利要求4的方法，其中该基因组编辑技术包括在该植物或其部分的基因组中引入点突变，从而在该植物基因组中引入NEENA的序列。

7.权利要求1至4的方法，其包括以下步骤：

a)提供包含一个或多个NEENA分子的表达构建体，其中该一个或多个NEENA分子包含权利要求1i)至v)中定义的核酸分子，并功能性连接到对该一个或多个NEENA分子而言为异源的启动子上；和

b)使包含所述一个或多个NEENA分子的所述表达构建体整合到所述植物或其部分的基因组中；并可选地

c)从所述转化植物或其部分再生包含所述一个或多个表达构建体的植物或其部分。

8.权利要求1至7的方法，其中所述一个或多个NEENA分子功能性连接到启动子，位于表达受所述启动子控制的核酸分子的翻译起始位点的上游或下游。

9.权利要求1至8的方法，其中所述一个或多个NEENA分子功能性连接到启动子，位于表达受所述启动子控制的核酸分子的5'UTR中。

10.权利要求1至8的方法，其中所述一个或多个NEENA分子功能性连接到组织特异性、发育特异性或诱导型启动子，位于表达受所述启动子控制的核酸分子的5'UTR中。