[发明专利]XXIII型胶原蛋白测定

说明书

本发明提供了靶向XXIII型胶原蛋白的单克隆抗体，以及使用所述抗体检测和定量表位的免疫测定和试剂盒。本发明还提供了一种用于鉴定和监测患有炎性肠病的受试者的方法。

技术领域

本发明涉及靶向XXIII型胶原蛋白的单克隆抗体，以及使用所述抗体的免疫测定和试剂盒。

背景技术

克罗恩病(CD)和溃疡性结肠炎(UC)是炎性肠病(IBD)的两种主要胃肠道疾病，具有相似的症状，例如炎症反应加剧和肠道结构损伤。CD可影响整个胃肠道，而UC主要局限于结肠黏膜[1]。IBD的病因尚不完全清楚，但据信其具有遗传基础和免疫系统对环境因素的异常反应[2]。

健康肠道的上皮被单层肠上皮细胞覆盖，该单层肠上皮细胞形成抵抗细菌和包括抗原和毒素在内的其他外来物质的保护屏障，并且仅对膳食营养素具有选择性渗透性[3,4]。上皮对于维持肠道健康很重要。然而，在CD和UC中，肠道通透性受损，导致大量细菌从肠腔侵入肠道组织，并增加免疫细胞从血流流入组织[5,6]，导致IBD患者的慢性胃肠道炎症[7]。肠上皮细胞之间的紧密联系主要由连接复合物调节，该连接复合物由紧密连接、粘附连接和桥粒组成[6]。许多研究表明，一些连接蛋白在IBD发炎的肠道组织中显著下调[8-11]，这可能是IBD肠道通透性丧失的主要原因。

XXIII型胶原蛋白是II型跨膜蛋白的成员，由Jacqueline Banyard等人于2003年首次在大鼠转移性肿瘤细胞中发现[12]。在人非小细胞肺癌细胞系和透明细胞肾细胞癌细胞系中，发现XXIII型胶原蛋白与细胞粘附和转移有关[13,14]。在此类细胞系中敲除XXIII型胶原蛋白导致细胞粘附分子表达改变和细胞粘附受损[13,14]，这表明XXIII型胶原蛋白可能是细胞粘附的调节剂。XXIII型胶原蛋白不仅在癌细胞中表达。在胚胎小鼠肠切片染色中，发现XXIII型胶原蛋白在肠的上皮表面表达，表明它可能在细胞相互作用中起重要作用[15]。

XXIII型胶原蛋白由短的胞质域、跨膜域和长的胞外域组成[12]。胞外域有几个胶原蛋白域，并被短的非胶原蛋白域截断[12]。新合成的XXIII型胶原蛋白可以作为跨膜蛋白运输到细胞表面，或被弗林蛋白酶在细胞内裂解，使胞外域释放到细胞外基质(ECM)[16]。然而，裂解的功能尚不清楚。研究表明，XXIII型在一系列癌症中上调[17-19]，可用作前列腺癌[18]、非小细胞肺癌[17]和透明细胞肾细胞癌的潜在生物标志物[14]。

然而，XXIII型胶原蛋白在其他疾病中作为生物标志物的用途尚未确定。

US 7,993,863 B(Zetter等人)描述了胶原蛋白样基因(CLG)产物，其在人前列腺癌和乳腺癌细胞系中表达，但在正常成人、胎盘、肺、肝、骨骼肌、肾或胰腺组织中不表达。还描述了具有序列LDQPCPVGPDGLPVPGCWHK(表示为SEQ ID No.14)的C端非胶原蛋白区。作者指出，该序列与跨膜胶原蛋白XMII和XXV具有高度同一性，因此得出结论，它可能是不好的表位。

有证据表明，与非活动性疾病相比，活动性IBD患者的肠道通透性增加[20]。连接/粘附蛋白，如E-钙粘蛋白、β-连环蛋白，在IBD患者的活动性炎症组织中显著下调[8]。因此，评估肠道通透性的方法可用于评估疾病负担[5]。然而，只有少数非侵入性生物标志物可用。粪便钙卫蛋白是主要由中性粒细胞表达的蛋白质，是IBD中最有希望的生物标志物。它与内窥镜疾病活动相关[21]，可以预测复发[22]并监测对治疗的反应[23]。但粪便钙卫蛋白仅测量肠道炎症，而不是直接测量组织损伤，因为钙卫蛋白是主要发现于中性粒细胞中的小的钙结合蛋白。密封蛋白-3(Claudin-3)是一种紧密连接蛋白，可以在尿液中测量，并可能反映紧密连接的丢失[24]。关于这种生物标志物的信息有限，需要在人体中进一步研究。因此，对于IBD肠道通透性评估的非侵入性生物标志物仍然存在巨大需求。

发明内容