[发明专利]干细胞外泌体的制备方法及其制备得到的药物或化妆品

说明书

本发明涉及干细胞外泌体的制备方法及其制备得到的药物或化妆品。本发明提供了脐带血干细胞制备得到的外泌体以及具有高抗原免疫原性表位的TRP‑2片段，并且制备得到了多个特异性的TRP‑2单克隆抗体，所述抗体与外泌体一起使用具有协同的增强抑制黑色素瘤细胞增殖的效果，能够用于制备美白的化妆品或者抑制黑色素瘤细胞增殖的药物及其药物组合物。具有较好的应用价值和前景。

技术领域

本发明涉及药物和化妆品领域，更具体的，涉及干细胞外泌体的制备方法及其制备得到的药物或化妆品。

背景技术

外泌体(exosomes)是一类由细胞分泌到胞外的囊泡。外泌体具有独特的物理化学性质，其直径为30～200nm，密度为1.13～1.19g/mL，组成包括细胞来源相关的脂质、蛋白质、RNA、DNA等物质，在其表面连接有大量的糖链，如甘露糖、聚乳糖胺和α2，6-唾液酸等。外泌体中常见的磷脂包括鞘磷脂、胆固醇、磷脂酰胆碱、神经酰胺、磷脂酰胆碱等。外泌体的完整囊泡结构能够保护其内部生物分子不受体液中各种酶的影响从而保持其完整性和生物活性。例如，外泌体中包含的mRNAs和miRNAs在进入受体细胞后仍具有翻译蛋白质、促进病毒感染等功能。据估计，单个外泌体含有约≤100拷贝数的蛋白质和≤10000拷贝数的核苷酸。

由于外泌体能够反映其来源细胞的特性，不同干细胞来源的外泌体表现的生物功能也不尽相同，其中最受人们关注的一类干细胞外泌体来源于间充质干细胞。间充质干细胞存在于骨髓、脂肪、脐血、牙髓、滑膜液等部位，是一种能够自我更新的多功能干细胞。由于具有多向分化、促进组织修复、抗炎、免疫抑制和保护神经等功能，间充质干细胞在细胞治疗领域有着独特的优势。大量研究工作表明，间充质干细胞通过旁分泌的形式发挥其生理功能，而外泌体作为一种细胞间传递信息的介质，在间充质干细胞的功能行使中发挥了重要作用。研究发现间充质干细胞来源的外泌体能够修复组织损伤、皮肤美白、抑制肿瘤生长等功效。

皮肤是人体最大的器官，位于人体结构的最外面。其主要功能是发挥免疫屏障作用，保护人体免受外界有害物质、病原体等入侵，还具有调节机体新陈代谢、感触觉等功能。然而，皮肤经常因各种内在病理及外界机械因素而受损，这些急、慢性的皮肤缺损给患者及社会带来了沉重的负担，此外，皮肤美白也是皮肤较为重要的选项。外泌体作为间充质干细胞旁分泌的一种亚细胞成分，其特殊的双分子层结构保护其内容物相对稳定且免受破坏，通过转运多种生物活性成分(蛋白质、脂质、核酸等)使其实现对受体细胞的多途径调节，在组织修复与再生、皮肤美白、揭示发病机制、参与免疫调节等方面都发挥了重要的作用，使无细胞治疗成为了可能。目前研究发现，外泌体作为干细胞旁分泌的载体，可以向受体细胞投递蛋白质、脂质、核酸等信号，从而影响其中的多个环节、多种细胞而促进皮肤的美白、修复与再生。

现有技术发现，甘草黄酮(光甘草定)是油溶性甘草提取物，是一种很好的美白成分。其美白作用主要来自其对酪氨酸酶的抑制、对多巴色素互变异构酶(TRP-2)活性的抑制以及对5,6-二羟基吲哚(DHI)的聚合的阻碍。甘草提取物还可干扰细胞增殖周期，使细胞生长受到抑制。随着剂量的增加，黑色素细胞数量明显减少进而实现美白效果。目前针对TRP-2活性抑制的物质还不是很多。

此外，由于不同的干细胞分泌的外泌体其功效可能存在着效果不同的影响，而且协同美白的化妆品目前还不够多。因此，提供一种新的美白用外泌体组合物化妆品是本领域追求的目标。

发明内容

本发明首先提供了一种脐带血干细胞外泌体。所述外泌体能够用于抑制黑色素瘤细胞的增殖，用于制备用于美白的化妆品或者用于抑制黑色素瘤细胞增殖的药物。

本发明另外提供一种具有高抗原活性的TRP-2表位肽蛋白序列，其序列如SEQ IDNO：1所示。

本发明另外的一方面，提供了一种特异性针对TRP-2的单克隆抗体。所述单克隆抗体的重链可变区序列如SEQ ID NO：2所示，轻链可变区序列如SEQ ID NO：3所示。

在某些实施方式中，所述单克隆抗体包含抗体或其抗原结合片段。