[发明专利]一种碱性成纤维细胞生长因子微球及其制备方法

权利要求书

1.一种制备微球的方法，包括以下步骤：

提供有机相，所述有机相包含溶解于有机溶剂中的聚己内酯和任选的有机相表面活性剂；优选地，聚己内酯的相对分子量为50,000～70,000，例如55,000；优选地，聚己内酯的质量百分比为2％～10％；优选地，有机相表面活性剂的体积百分比为0.2％～4.0％；优选地，通过将聚己内酯和任选的有机相表面活性剂加入有机溶剂中，静置溶解过夜，得到有机相；

提供外水相，所述外水相包含溶解于水中的外水相表面活性剂；

提供内水相，所述内水相包含溶解于水中的碱性成纤维细胞生长因子和任选的内水相表面活性剂；优选地，所述碱性成纤维细胞生长因子的质量百分比为0.0000005％～0.50％，例如0.05％-0.50％；

由内水相和有机相得到油包水初乳；优选地，所述内水相和有机相的体积比为1∶5～1∶20；

由油包水初乳和外水相得到水包油包水复乳；优选地，所述有机相和外水相的体积比为1∶5～1∶20；

使复乳中的有机溶剂挥发，得到微球；以及

收集微球。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述有机相表面活性剂选自司盘-80、聚甘油油酸酯、硬脂酸甘油酯。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述有机溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷或四氢呋喃。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述外水相表面活性剂选自吐温-80、PVA、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素钠；优选地，所述外水相表面活性剂是质量百分比为0.5％～5.0％的PVA和/或体积百分比为0.0001％～1％的吐温-80。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述外水相还包含渗透压调节剂(例如NaCl)或pH缓冲剂(例如磷酸盐或碳酸盐)；优选地，渗透压调节剂的质量百分比为0～7％；优选地，pH值为6.0～8.0；优选地，所述外水相通过在60～90℃持续搅拌15～90分钟后，静置冷却至室温后得到；优选地，所述外水相在缓冲体系(例如磷酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液和磷酸缓冲盐溶液中的一种)中制备。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述内水相表面活性剂选自PVA、吐温、司盘；优选地，所述内水相表面活性剂是质量百分比为0～4％的PVA；优选地，通过将PVA加至碱性成纤维细胞生长因子水溶液中，静置溶解后得到内水相。

7.根据权利要求1所述的方法，其中通过在搅拌下将内水相在有机相液面上方以一定速率(例如0.5～2.0ml/min)滴加至有机相中，任选地在滴加结束后优选以相同转速(例如1000-3000rpm，例如2500rpm)继续搅拌例如0～1.5min，得到油包水初乳。

8.根据权利要求1所述的方法，其中通过在搅拌下将油包水初乳在外水相液面下方以一定速率(例如0.5～2.0ml/min)加至外水相中，任选地在滴加结束后优选以相同转速(例如1000-3000rpm，例如2,500rpm)继续搅拌例如0～1.5min，得到水包油包水复乳，任选调节转速(例如600～1200rpm)，继续搅拌(例如6～24h)使有机溶剂挥发，得到微球。

9.根据权利要求1所述的方法，其中通过离心后(例如3000-10000rpm，例如6500rpm)弃去上清液收集微球，任选清洗微球(例如用注射用水清洗)，任选将微球用水分散后冻干；优选地，所述冻干过程包括：以-0.25～-1.00℃/min的降温速率将微球分散液从室温冷冻至-30℃，并在-30℃维持120min；待所述冷冻结束后，调整真空度至200～300μBar，将温度从-30℃阶段式升温至-25℃、-20℃、-15℃，其中各阶段升温速率为+0.08～0.17℃/min、维持时间为60～180min；待一次升华结束后，调整真空度至150μB、温度至-15℃，持续120～180min；待二次升华结束后，得到干燥的微球。

10.一种微球，包括外壳和内核，所述外壳包含聚己内酯，所述内核包含碱性成纤维细胞生长因子。