[发明专利]一种猪瘟抗体检测试剂盒及制备方法在审
申请号: | 202011173145.3 | 申请日: | 2020-10-28 |
公开(公告)号: | CN112322591A | 公开(公告)日: | 2021-02-05 |
发明(设计)人: | 朱海侠;查代灿;潘小慧;傅星源;李枭辰;包松英;张慧云 | 申请(专利权)人: | 兆丰华生物科技(南京)有限公司;兆丰华生物科技(福州)有限公司;北京科牧丰生物制药有限公司;兆丰华生物科技(南京)有限公司北京生物医药科技中心 |
主分类号: | C12N7/02 | 分类号: | C12N7/02;G01N33/569;G01N33/543 |
代理公司: | 福州君诚知识产权代理有限公司 35211 | 代理人: | 戴雨君 |
地址: | 210000 江苏省南京*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 猪瘟 抗体 检测 试剂盒 制备 方法 | ||
1.一种猪瘟抗体检测试剂盒,其特征在于:所述试剂盒包括以下组分:包被板用抗原、抗原包被板、鼠抗猪瘟病毒单克隆抗体、羊抗鼠IgG-HRP、阳性对照、阴性对照、样品稀释液、洗涤液、TMB显色液和终止液,所述包被板用抗原为通过PEG浓缩、蔗糖密度梯度离心后纯化的猪瘟病毒。
2.根据权利要求1所述的一种猪瘟抗体检测试剂盒,其特征在于:所述包被板用抗原的制备方法如下:采用牛睾丸原代细胞进行猪瘟病毒的扩大培养,按照2-5g猪瘟脾淋毒接种到10000ml-15000ml细胞培养瓶中的比例进行猪瘟病毒的增殖,经带毒传代1-2次后,收获病毒液,即为猪瘟病毒培养物;
将收获的猪瘟病毒培养物经反复冻融、离心去除细胞碎片后,用聚乙二醇沉淀法进行病毒浓缩,再通过蔗糖密度梯度离心获取纯化的猪瘟病毒。
3.根据权利要求2所述的一种猪瘟抗体检测试剂盒,其特征在于:所述病毒浓缩过程,聚乙二醇的浓度为8-10%,沉淀时间为16-18h。
4.根据权利要求1所述的一种猪瘟抗体检测试剂盒的制备方法,其特征在于:抗原包被浓度为0.33μg/ml,包被条件为4℃包被16-18h或37℃包被1-2h。
5.根据权利要求1所述的一种猪瘟抗体检测试剂盒的制备方法,其特征在于:所述抗原包被板是用碳酸盐缓冲液作为包被液,将通过PEG浓缩、蔗糖密度梯度离心后纯化的猪瘟病毒稀释至浓度为0.33μg/ml,包被酶标板。
6.根据权利要求1所述的一种猪瘟抗体检测试剂盒,其特征在于:所述样品稀释液为PBS缓冲液,洗涤液为PBST缓冲液、显色液为TMB显色液,终止液为H2SO4。
7.如权利要求1所述的猪瘟抗体检测试剂盒在检测猪瘟抗体中的应用。
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