[发明专利]一种干细胞培养系统

说明书

本发明提供一种干细胞培养系统，具体涉及细胞技术领域，包括支持人多能干细胞长期培养的人源化基质、人源化培养基；人源化基质制备步骤如下：S1、将新鲜胎盘剪切成块状，清洗二次，过滤；S2、以冷的1M氯化钠缓冲液洗，清水更换时间为6至10小时一次，清洗6次；S3、以冷的0.3M醋酸溶液洗3天，每6至10小时换液一次，第九次换0.3M醋酸溶液时，过滤后称重；S4、将称重后的物质8至12℃温度下离心1小时，去掉上清，收集沉淀并称重，以质量体积比为1∶1的条件加入1.8M尿素缓冲液，8至12℃温度下搅拌24小时；S5、8至12℃温度下离心30min，上清液装入30KD的透析袋中，透析好的液体，即为人源化基质。本发明可确保细胞状态稳定和活性。

技术领域

本发明属于细胞技术领域，具体涉及一种干细胞培养系统。

背景技术

干细胞是一类具有无限的或者永生的自我更新能力的细胞、能够产生至少一种类型的、高度分化的子代细胞。多年来对干细胞的定义不断进行修正，并从不同的层面上来进行定义。目前大多数生物学家和医学家认为干细胞是来自于胚胎、胎儿或成体内具有在一定条件下无限制自我更新与增殖分化能力的一类细胞，能够产生表现型与基因型和自己完全相同的子细胞，也能产生组成机体组织、器官的已特化的细胞，同时还能分化为祖细胞。干细胞培养可促进人类干细胞的长期生长，同时还能保持多向分化潜能。干细胞培养基和干细胞无血清营养添加物共同使用，细胞贴壁及增值效果更好；但现有的干细胞培养系统，容易致使细胞出现状态不稳定、细胞老化现象；

发明内容

本发明的目的是提供一种干细胞培养系统，可确保细胞状态稳定和活性。

本发明提供了如下的技术方案：

一种干细胞培养系统，包括支持人多能干细胞长期培养的人源化基质、人源化培养基；人源化基质制备步骤如下：

S1、将新鲜胎盘剪切成块状，并入水，并在8至12℃温度下进行搅拌6至10小时，然后进行筛分，并用清水冲洗，水温为8至12℃温度下，清水更换时间为6至10小时一次，清洗二次，第二次过滤后，将截留的组织用冷的1.5M氯化钠缓冲液悬起，8至12℃温度下搅拌；

S2、以冷的1M氯化钠缓冲液洗，清水更换时间为6至10小时一次，清洗6次，第6次更换氯化钠缓冲液时进行过滤，将截留的组织用冷的0.3M醋酸溶液悬起，8至12℃温度下搅拌；

S3、以冷的0.3M醋酸溶液洗3天，每6至10小时换液一次，第九次换0.3M醋酸溶液时，过滤后称重；

S4、将称重后的物质8至12℃温度下离心1小时，去掉上清，收集沉淀并称重，以质量体积比为1∶1的条件加入1.8M尿素缓冲液，8至12℃温度下搅拌24小时；

S5、8至12℃温度下离心30min，上清液装入30KD的透析袋中，以三乙醇胺缓冲液+0.5％氯仿为周围溶液于8至12℃温度下透析2小时，然后彻底清洗烧杯与透析袋外表面后，以冷的三乙醇胺缓冲液为周围溶液，继续8至12℃温度下透析，每2小时换三乙醇胺缓冲液一次，共换3次，最后一次透析时，8至12℃温度下，过夜，透析好的液体，即为人源化基质；

优选的，人源化培养基含有人血浆的氯化钠沉淀组分、100U/m升青霉素、100μ克/m升链霉素、10mM非必需氨基酸NEAA、10mM巯基乙醇。

优选的，S1步骤中，氯化钠缓冲液配置过程如下：40克氯化钠与15m升三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液，溶于Mi升升iQ水中，调节p小时至7.0，定容至500毫升。

优选的，S1步骤中，三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液按缓冲液配置过程如下：200克三(羟甲基)氨基甲烷碱溶于600毫升超纯水中，调节p小时至7.0，加超纯水定容至1升。

优选的，S3步骤中，以胃蛋白酶制备如下：组织为1∶300的质量比加入胃蛋白酶，把200克/升将酶与组织块悬起于0.2M醋酸溶液中，10℃温度下搅拌8小时。