[发明专利]一种干细胞培养系统

权利要求书

1.一种干细胞培养系统，其特征在于：包括支持人多能干细胞长期培养的人源化基质、人源化培养基；人源化基质，其制备步骤如下：

S1、将新鲜胎盘剪切成块状，并入水，并在8至12℃温度下进行搅拌6至10小时，然后进行筛分，并用清水冲洗，水温为8至12℃温度下，清水更换时间为6至10小时一次，清洗二次，第二次过滤后，将截留的组织用冷的1.5M氯化钠缓冲液悬起，8至12℃温度下搅拌；

S2、以冷的1M氯化钠缓冲液洗，清水更换时间为6至10小时一次，清洗6次，第6次更换氯化钠缓冲液时进行过滤，将截留的组织用冷的0.3M醋酸溶液悬起，8至12℃温度下搅拌；

S3、以冷的0.3M醋酸溶液洗3天，每6至10小时换液一次，第九次换0.3M醋酸溶液时，过滤后称重；

S4、将称重后的物质8至12℃温度下离心1小时，去掉上清，收集沉淀并称重，以质量体积比为1∶1的条件加入1.8M尿素缓冲液，8至12℃温度下搅拌24小时；

S5、8至12℃温度下离心30min，上清液装入30KD的透析袋中，以三乙醇胺缓冲液+0.5％氯仿为周围溶液于8至12℃温度下透析2小时，然后彻底清洗烧杯与透析袋外表面后，以冷的三乙醇胺缓冲液为周围溶液，继续8至12℃温度下透析，每2小时换三乙醇胺缓冲液一次，共换3次，最后一次透析时，8至12℃温度下，过夜，透析好的液体，即为人源化基质。

2.根据权利要求1一种干细胞培养系统，其特征在于：人源化培养基含有人血浆的氯化钠沉淀组分、100U/m升青霉素、100μ克/m升链霉素、10mM非必需氨基酸NEAA、10mM巯基乙醇。

3.根据权利要求2一种干细胞培养系统，其特征在于：S1步骤中，氯化钠缓冲液配置过程如下：40克氯化钠与15m升三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液，溶于Mi升升iQ水中，调节p小时至7.0，定容至500毫升。

4.根据权利要求3一种干细胞培养系统，其特征在于：三(羟甲基)氨基甲烷缓冲液按缓冲液配置过程如下：200克三(羟甲基)氨基甲烷碱溶于600毫升超纯水中，调节p小时至7.0，加超纯水定容至1升。

5.根据权利要求4一种干细胞培养系统，其特征在于：以胃蛋白酶制备如下：组织为1∶300的质量比加入胃蛋白酶，把200克/升将酶与组织块悬起于0.2M醋酸溶液中，8至12℃温度下搅拌6至10小时。

6.根据权利要求5一种干细胞培养系统，其特征在于：尿素缓冲液配制如下：240.0克尿素、12.1克三(羟甲基)氨基甲烷碱、18.0克氯化钠溶于1.8升超纯水中，浓小时C升调节p小时至7.4，超纯水定容至2升。

7.根据权利要求5一种干细胞培养系统，其特征在于：其中三乙醇胺缓冲液按配制如下：15克三(羟甲基)氨基甲烷碱，20克氯化钠溶于1.5升超纯水中，浓小时C升调节p小时至7.0，超纯水定容至2升。