[发明专利]一种DNA聚合酶及其在PCR检测中的应用

权利要求书

1.一种DNA聚合酶，是如下a1或a2所述的蛋白质：

a1.由氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的蛋白和氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示的蛋白自N端到C端连接而成的融合蛋白；

a2.将a1所述的融合蛋白的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加而形成的具有DNA聚合酶功能的蛋白质。

2.根据权利要求1所述的DNA聚合酶，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。

3.编码权利要求1或2所述的DNA聚合酶的基因。

4.根据权利要求3所述的基因，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示。

5.包含权利要求3或4所述基因的表达盒、载体或重组菌。

6.一种PCR试剂盒，其特征在于：包含权利要求1或2所述的DNA聚合酶。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：还包含2×反应缓冲液；所述2×反应缓冲液包含：100mM Tris-Cl，pH 8.5；30mM(NH₄)₂SO₄，50mM KCl，0.01％(g/ml)BSA，0.05％(v/v)TritonX-100，4mM MgCl₂。

8.根据权利要求6或7所述的试剂盒，其特征在于：还包含10×增强剂或5×q增强剂；所述10×增强剂包含150mM四甲基氯化铵；所述5×q增强剂包含：2.5M甜菜碱，5mM DTT，5％(v/v)DMSO，30μg/mL BSA。

9.一种PCR方法，其特征在于：使用权利要求1或2所述的DNA聚合酶或权利要求6-8任一所述的试剂盒进行PCR反应。

10.根据权利要求9所述的PCR方法，其特征在于：

所述PCR反应的体系包含：2×反应缓冲液，10×增强剂，dNTP，正向引物，反向引物，权利要求1或2所述的DNA聚合酶，模板DNA；

所述2×反应缓冲液包含：100mM Tris-Cl，pH 8.5；30mM(NH₄)₂SO₄，50mM KCl，0.01％(g/ml)BSA，0.05％(v/v)TritonX-100，4mM MgCl₂；

所述10×增强剂包含150mM四甲基氯化铵。

11.根据权利要求9所述的PCR方法，其特征在于：

所述PCR反应的体系包含：2×反应缓冲液，5×q增强剂，dNTP，正向引物，反向引物，荧光探针，权利要求1或2所述的DNA聚合酶，模板DNA；

所述2×反应缓冲液包含：100mM Tris-Cl，pH 8.5；30mM(NH₄)₂SO₄，50mM KCl，0.01％(g/ml)BSA，0.05％(v/v)TritonX-100，4mM MgCl₂；

所述5×q增强剂包含：2.5M甜菜碱，5mM DTT，5％(v/v)DMSO，30μg/mL BSA。