[发明专利]一种裂解疫苗裂解效果的检测方法及应用

说明书

本发明属于疫苗技术领域，具体公开了一种裂解疫苗裂解效果的检测方法。该检测方法采用聚合物分析系统进行检测，对不同裂解程度的系列工作液进行检测，分别得到不同裂解程度的工作液中不同粒径病毒颗粒的分布丰度，之后进一步得到不同裂解程度的工作液中病毒颗粒的累积分布丰度，以病毒颗粒的累积分布丰度为纵坐标，裂解程度为横坐标，进行线性回归，求得标准曲线方程；然后采用聚合物分析系统对待测样本进行检测，得到待测样本中病毒颗粒的累积分布丰度，再根据标准工作曲线计算得到所测样本的裂解程度。本发明提供的裂解疫苗裂解效果的检测方法可以定量评价裂解疫苗中病毒的裂解程度，提高裂解效果检测数据的可靠性。

技术领域

本发明涉及疫苗技术领域，特别是涉及一种裂解疫苗的裂解效果检测，具体涉及一种裂解疫苗裂解效果的检测方法。

背景技术

流感病毒裂解疫苗是用世界卫生组织(WHO)推荐的并经国家药品管理部门批准的流感病毒株接种健康鸡胚，经培养、收获，灭活、纯化、裂解制成的生物制品。目前流感病毒裂解疫苗已广泛应用于预防流感病毒引起的流行性感冒。

流感病毒属于正黏病毒科，具有容易聚合成团的性质。在制备流感疫苗过程中，需要进行病毒裂解处理。一般在现在的流感病毒裂解疫苗生产过程中，常使用去氧胆酸钠、TritonX100、TrintonN101、乙醚和聚山梨酯80等裂解剂裂解病毒。病毒的裂解程度或者说裂解效果(即已裂解病毒占病毒总量的百分数)会直接影响疫苗的免疫原性和安全性。例如如果裂解不足，会有部分病毒保持完整形态，就会影响疫苗的使用安全性；病毒裂解过度，血凝素形态被破坏，就会影响疫苗的免疫原性。因此，在生产过程中以及产品质检时，都需要对裂解疫苗的裂解效果进行检测评价，为流感病毒裂解疫苗的生产和质量控制提供科学依据。

目前通用的流感病毒裂解疫苗裂解效果的评价手段是电镜观察法，采用负染技术进行病毒形态电镜观察，即用重金属染液里的金属原子作为电子“颜料”，把密度较低的生物标本(病毒)包绕而形成具有明显反差的方法。电镜中的电子束能够通过低电子密度的病毒颗粒却无法通过金属粒子背景，从而使病毒颗粒呈现出明亮清晰的结构，即负反差。因此通过透射电子显微镜即可观察病毒形态，从而对裂解效果进行判断。实际应用中通常会选取多个视野，观察不同视野中完整病毒的数量，综合评价病毒的裂解效果。电镜观察法虽有可直接观察病毒颗粒微观结构和高分辨率的优点，但也存在取样量小和视野选择受限等问题，导致检测结果不够准确且无法定量评价病毒的裂解效果。因此，有必要开发一种新的裂解疫苗裂解效果的检测方法，以期能准确评价病毒的裂解效果。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种裂解疫苗裂解效果的检测方法，可以定量评价裂解疫苗中病毒的裂解程度，提高裂解效果检测数据的可靠性。

具体地，本发明提供了一种裂解疫苗裂解效果的检测方法，采用聚合物分析系统(Aggregates Sizer)进行检测，检测条件包括：采用高浓度池测定装置SALD-HC75S，采集软件为Wing SALD bio-7500。

作为一种优选的实施方案，所述的检测方法，包括：采用聚合物分析系统对不同裂解程度的系列工作液进行检测，分别得到不同裂解程度的工作液中不同粒径病毒颗粒的分布丰度，之后进一步得到不同裂解程度的工作液中病毒颗粒的累积分布丰度，以病毒颗粒的累积分布丰度为纵坐标，裂解程度为横坐标，进行线性回归，求得标准曲线方程和相关系数；以及，

采用聚合物分析系统对待测样本进行检测，得到待测样本中病毒颗粒的累积分布丰度，再根据标准工作曲线计算得到所测样本的裂解程度。

作为一种优选的实施方案，所述系列工作液的裂解程度在60％～100％之间。当裂解程度为50％或者小于50％时，检测时会出现多重散射，信号偏移，造成检测结果不准确，因此本发明方法标准曲线裂解程度的检测下限为60％。

作为一种优选的实施方案，所述不同裂解程度的系列工作液的裂解程度分别为60％、70％、80％、90％、100％。