[发明专利]一种NGS靶向探针捕获法检测呼吸道25种RNA病毒的试剂盒及方法

说明书

本发明涉及基因工程技术领域。本发明公开了一种用于呼吸道25种RNA病毒检测试剂盒及方法。本发明的方法基于NGS靶向探针捕获技术，针对人类呼吸道25种RNA病毒设计特异性强的捕获探针组合。本发明的用于呼吸道25种RNA病毒检测试剂盒和检测技术具有靶向特异性、灵敏度高、覆盖面广的优点，为呼吸道病毒感染提供了重要的检测手段。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及一种NGS靶向探针捕获法检测呼吸道25种RNA病毒的试剂盒及方法。

背景技术

成人和儿童受突然死亡的影响不均衡。5岁以下的儿童约有15～86％是由感染引起的突然死亡，其中20～48％是由呼吸道病毒感染引起的。因此，呼吸道病毒性感染是导致儿童在心脏病发作之前突然死亡的主要原因之一，而且远远早于中枢神经系统的受累。这些病毒与普通人群中引起上或下呼吸道感染的病毒相同，如流感病毒A和B(FluA或FluB)、呼吸道合胞病毒(RSV)、副流感病毒、偏肺病毒、腺病毒(ADV)和鼻肠病毒等。呼吸系统病毒相关的流行病学具有明显的季节性且冬季属于高峰期。

呼吸道病毒引起的死亡是由感染性休克、细支气管阻塞和呼吸障碍引起的呼吸暂停和严重的、可能危及生命的低氧血症引起的。它发生在急性感染或慢性呼吸道疾病(如哮喘或慢性阻塞性肺病)加重的情况下。

目前有许多方法检测呼吸道病毒，如分离培养法、免疫抗体法、荧光PCR法以及mNGS法等，随着mNGS技术的发展，mNGS技术检测感染病原微生物越来越得到临床医生的重视和亲睐，使得更多的感染患者从中获利。但是mNGS技术检测病原微生物也存在一定的局限性，如成本高，具有假阳性以及灵敏度不高等。本发明根据人呼吸道25种病毒基因组序列设计特异性的捕获探针，用于针对人呼吸道25种病毒进行捕获测序，该方法具有特异性强，灵敏度高，成本低，数据分析简单等优点。

发明内容

本发明的主要目的在于，克服现有技术中存在的缺陷，提供了一种呼吸道25种病RNA毒检测的捕获探针、试剂盒及方法，该发明具有特异性强，灵敏度高，成本低，数据分析简单等优点，为呼吸道病毒性感染患者提供了一种良好的检测手段。

本发明的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。

本发明的一个方面提供了一种NGS靶向探针捕获法检测呼吸道25种RNA病毒的试剂盒，所述试剂盒包括寡核苷酸混合物，能够与呼吸道病毒种类的遗传材料特异性结合；所述呼吸道病毒种类选自：人呼吸道合胞病毒A，人呼吸道合胞病毒B，甲型流感病毒(H9N2)，甲型流感病毒(H2N2)，甲型流感病毒(H3N2)，甲型流感病毒(H1N1)，甲型流感病毒(H5N1)，甲型流感病毒(H7N9)，乙型流感病毒，副流感病毒1型，副流感病毒2型，副流感病毒3型，副流感病毒4型，人偏肺病毒，人冠状病毒HKU1，人冠状病毒NL63，人冠状病毒229E，人冠状病毒OC43，鼻病毒A，鼻病毒C，鼻病毒B14，人副肠孤病毒1型，人副肠孤病毒6型，人肠病毒C104，人肠病毒C109。

在本发明优选的实施方案中，所述寡核苷酸混合物包含探针组合，所述探针组合能够与所述25种呼吸道病毒种类的遗传材料RNA杂交，所述探针的核苷酸序列如SEQ IDNO.1～SEQ ID NO.50所示。

在本发明优选的实施方案中，所述试剂盒还包含探针保存液TE buffer。

本发明的目的及解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现。

本发明的另一个方面还提供了一种检测呼吸道25种RNA病毒的方法，所述方法包括以下步骤：

1)总RNA的提取：采用QIAamp Viral RNA Mini Kit提取试剂盒，为满足文库构建，提取所需的RNA的浓度不低于5ng/ul且纯度合格；