[发明专利]一种新型冠状病毒IgGIgM抗体联合检测试剂制备方法

说明书

本发明提供一种新型冠状病毒IgGIgM抗体联合检测试剂制备方法，具体涉及生物技术领域，用磷酸盐缓冲液将鼠抗人IgM单克隆抗体稀释到包被浓度为2.0至5.0mg/ml；将鼠抗人IgG单克隆抗体稀释到包被浓度为1.0至3.0mg/ml；将鼠抗新型冠状病毒N抗原抗体稀释成包被浓度为1.0至5.0mg/ml；包被液划到硝酸纤维素膜上；进行干燥并储存备用；将标记浓度为30至50μg/ml的重组新型冠状病毒N抗原与胶体金进行偶联制得胶体金标记的复合物，以转速为10000转/分钟离心20分钟，弃上清；然后加入胶体金结合物稀释液至原体积的80％，然后用稀释液按50μl/cm2浸泡涂抹玻璃纤维素膜制成金标垫；装配成反应板，装卡后，装入铝箔袋内制成检测试剂。本发明可提高检出的灵敏度与特异性。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种新型冠状病毒IgGIgM抗体联合检测试剂制备方法。

背景技术

冠状病毒(Coronavirus)是一类广泛存在于人类、动物和鸟类的RNA病毒，其能导致呼吸道、胃肠、肝部以及神经等部位的疾病。目前已知6种冠状病毒感染人，其中四个(229E、OC43、NL63和HKU1)普遍存在，并感染少量免疫力低下人群，造成普通感冒的症状；另外两个至重症急性呼吸综合征病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus,SARS至CoV)和中东呼吸道综合征病毒(Middle east respiratory syndromecoronavirus,MERS至CoV)来源于动物，但曾在部分地区发生广泛的感染，导致死亡及大量的经济损失。

新冠病毒核酸检测在中国《新冠肺炎诊疗方案》第一版到第七版，一直是公认的最准确的确证检测方法学。但该技术对实验场所人员要求高、操作繁琐、耗时长，检测人员感染风险高，结果受标本质量、病毒感染部位及表达量等因素影响较大，核酸单项检测并不能满足排查诊断的要求。作为机体免疫系统抵抗病毒的重要效应分子，血清特异性抗体是诊断感染的另一关键证据。抗体检测的操作简单便捷，对实验环境及人员要求不甚苛刻，仅需采集血液标本，很大程度上降低医护人员在标本采集和检测过程中被感染的风险，是快速筛查和核酸辅助诊断的重要手段。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型冠状病毒IgGIgM抗体联合检测试剂制备方法，用人源化的鼠抗人IgM单克隆抗体和人源化的鼠抗人IgG单克隆抗体划检测线T1/T2，采用捕获法原理直接捕获检测样本中的全部IgM和IgG抗体，可以有效的避免和减少样本中其他IgG、IgM等抗体的产生的非特异性干扰，提高检出的灵敏度与特异性。

本发明提供了如下的技术方案：

一种新型冠状病毒IgGIgM抗体联合检测试剂制备方法，具体步骤如下：

S1、用磷酸盐缓冲液将鼠抗人IgM单克隆抗体稀释到包被浓度为2.0至5.0mg/ml；

将鼠抗人IgG单克隆抗体稀释到包被浓度为1.0至3.0mg/ml；

将鼠抗新型冠状病毒(SARS-CoV-2)N抗原抗体稀释成包被浓度为1.0至5.0mg/ml；

用金标划线机将三种包被液划到硝酸纤维素膜上，分别标记T1、T2和C；

然后干燥后即获得划线硝酸纤维素膜，进行干燥并储存备用；

S2、将标记浓度为30至50μg/ml的重组新型冠状病毒(SARS-CoV-2)N抗原与胶体金进行偶联制得胶体金标记的复合物，以转速为10000转/分钟离心20分钟，弃上清；

然后加入胶体金结合物稀释液至原体积的80％，然后用稀释液按50μl/cm2浸泡涂抹玻璃纤维素膜制成金标垫，进行干燥并储存备用；

S3、将划线硝酸纤维素膜、金标垫、吸水纸、样品垫装配成反应板，再用切条机切成3至4mm的试纸条，装卡后，装入铝箔袋内制成检测试剂。