[发明专利]一种猪粪便污染的微生物溯源方法在审
| 申请号： | 202010265405.3 | 申请日： | 2020-04-07 |
| 公开（公告）号： | CN111440883A | 公开（公告）日： | 2020-07-24 |
| 发明（设计）人： | 许又分;刘如铟 | 申请（专利权）人： | 中国科学院大学 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 崔自京 |
| 地址： | 101400 北京市*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种猪 粪便 污染 微生物 溯源 方法 | ||
1.一种猪粪便污染的微生物溯源引物，其特征在于，包括正向引物PF163F和反向引物Bac708R，引物序列为：
正向引物PF163F：5’-GCGGATTAATACCGTATGA-3’，SEQ ID NO:1所示；
反向引物Bac708R：5’-CAATCGGAGTTCTTCGTG-3’，SEQ ID NO:2所示。
2.一种基于权利要求1的引物组的试剂盒，包括正、反向引物和反应液。
3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述正、反向引物：25μmol/L正向引物PF163F；25μmol/L反向引物Bac708R；所述反应液包括10×Ex Taqbuffer、dNTP Mixture、5U/μL TaKaRa Ex Taq、5mg/mLBSA。
4.一种猪粪便污染的微生物溯源方法，其特征在于，PCR反应体系：5μL的10×ExTaqbuffer、4μL的2.5mM dNTP Mixture、0.25μL 5U/μL TaKaRa Ex Taq、1μL 5mg/mL BSA、1μL 25μmol/L正向和1μL 25μmol/L反向引物、1μL模板DNA，最后用无菌超纯水补至25μL。
5.如权利要求4所述的一种猪粪便污染的微生物溯源方法，其特征在于，PCR反应条件为：95℃3min，30个循环：95℃30s，62℃1min，72℃30s，最后72℃10min。
6.一种权利要求1所述引物或权利要求2～3任一所述的试剂盒在中国环境水体监测中的应用。
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