[发明专利]基于TIPE-2的新冠病毒负调疫苗及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种基于TIPE‑2的新冠病毒负调疫苗及其制备方法和应用，该负调疫苗是以阳离子多肽和新冠病毒S蛋白CD8+T细胞表位肽的复合物为基因载体包裹TIPE‑2基因重组表达载体自组装而成；将该负调疫苗转染树突状细胞并与T细胞共培养，能够有效降低新冠病毒S蛋白刺激下T细胞的增殖能力、细胞因子分泌能力和表面分子的活化分子表达率，表明该负调疫苗能够有效诱导新冠病毒S蛋白特异性的T细胞耐受，可用于制备诱导新冠病毒S蛋白特异性T细胞耐受的药物，在抗新冠病毒导致的组织损伤治疗领域具有良好的开发应用前景。

技术领域

本发明涉及一种负调疫苗，特别涉及一种基于TIPE-2的负调疫苗，还涉及该负调疫苗的制备方法和应用。

背景技术

新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019,COVID-19)是由一种新的β冠状病毒-新型冠状病毒(2019novel corona virus,2019-nCoV)引起,以血管紧张素转化酶2(Angiotensin converting enzyme 2,ACE-2)作为受体侵入细胞导致肺损伤,病情加重与继发引起的全身性炎症反应密切相关,重症患者会出现急性呼吸窘迫综合征(Acuterespiratory distress syndrome,ARDS)和感染性休克,最终出现多器官功能衰竭。目前大多数药物如巴利替尼、瑞德西韦、氯喹等尚处于临床试验阶段,尚无特效药治疗。COVID-19传染性强,可引起多种严重的并发症,对全球公共安全造成了极大威胁。研究其病原学及发病机制,进而开展对治疗药物和疫苗的临床研究,对及时控制病毒传播,防止病情恶化进展,减少并发症及病死率具有重大意义。

冠状病毒的基因组大小从26到32千碱基(Kb)不等,拥有RNA病毒最大的基因组。所有冠状病毒在基因组的组织和表达上都有相似之处,其中16个非结构蛋白由5'端的开放阅读框架(ORF)1a/b编码,紧随其后的是结构蛋白刺突蛋白(S)、包膜蛋白(E)、膜蛋白(M)和核衣壳蛋白(N),这些蛋白在3'端由其他ORF编码。其中S蛋白介导病毒与宿主细胞表面受体的附着以及与宿主细胞膜之间的融合,促进病毒进入宿主细胞。SARS冠状病毒引起的细胞因子风暴主要涉及白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-12(IL-12)、γ-干扰素(IFN-γ)、趋化因子IP-10(Interferon-inducible protein-10,IP-10)以及人单核细胞趋化蛋-1(Membrane cofactorprotein-1,MCP-1)等,COVID-19患者的病理结果提示CD8+T细胞中含有高浓度的细胞毒性颗粒,CD4+和CD8+T淋巴细胞减少,但同时也被过度激活。T淋巴细胞介导的损伤可能是导致患者病情恶化的重要因素。诱导免疫耐受是治疗移植排斥、自身免疫性疾病和过敏性疾病的重要方式。由于T细胞的活化在机体免疫系统的活化中扮有重要角色，因此在诱导免疫耐受的各种策略中，诱导T细胞耐受是一种比较理想的策略。研究表明，T细胞的活化不仅需要抗原肽与主要组织相容性复合体(MHC)的复合刺激，而且需要B7家族成员提供关键的共刺激信号。

胖瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2(tumor necrosis fator-α-inducedprotein8-like2，TIPE-2)最早在小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎动物模型中发现，主要表达于胸腺、淋巴结等组织及巨噬细胞、淋巴细胞等免疫细胞，在免疫反应中发挥重要的负向调节作用。研究发现TIPE-2在系统性红斑狼疮、慢性乙肝病毒感染及哮喘中表达均有改变，并通过诱导巨噬细胞极化减轻炎症反应。TLRs是一类重要的跨膜病原体识别受体，激活固有免疫反应。同时TLRs作为“桥梁”连接固有免疫系统和获得性免疫系统，参与维持机体免疫功能的动态稳定。深入研究发现TIPE-2通过负向调控TLR维持免疫自稳。TIPE-2有抑制T细胞活化的作用，是一个有力的T细胞活化负调节分子。