[发明专利]一种海水青鳉受精卵孵化方法

说明书

本发明涉及一种海水青鳉受精卵孵化方法，属于水产养殖领域，本发明方法通过将受精卵在不同盐度梯度的海水中进行孵化，孵化的理化条件为温度26‑28℃，湿度40‑60％，光强80‑125μmol·m^‑2·s^‑1，光暗比为14：10；本发明方法能够获得清洁度高的受精卵，便于胚胎学实验观察和显微注射等实验操作，本发明方法受精卵的孵化率可高达94.7％。且孵化得到的海水青鳉仔鱼经过后续长期观察，能够正常发育、成长、繁殖，未发现有异常现象存在。

技术领域

本发明涉及鱼类繁育领域，具体涉及海洋模式生物海水青鳉的受精卵高效孵化方法。

背景技术

海水青鳉(Oryzias melastigma)隶属于脊索动物门、辐鳍鱼纲、颚针鱼目、怪颌鳉科、青鳉属。其个体较小，成体体长仅为28±2mm，易于实验室内人工培养。繁殖周期短，3月龄即可达到性成熟。受精卵直径约为0.9±0.05mm，整体呈现透明色，便于观察。由于具有以上众多生物学优势，海水青鳉已被推荐为一种理想的海洋模式鱼种，广泛用于生物发育学、生态毒理学和分子生物学研究。

海水青鳉产卵类型属于典型的黏着沉性卵，与经济鱼种大泷六线鱼、鲆鲽类、鲱鱼、颌针鱼等相似。其孵化温度要求较高，需在26-28℃之间，孵化周期也较长，通常为12-14天。如此高温条件下，受精卵所在水体往往会滋生藻类，例如小球藻、硅藻等微藻。到孵化后期，大量藻类会附着在受精卵表面，导致受精卵整体发黑，仔稚鱼的破壳孵化进程受阻，同时也会影响胚胎观察等实验的正常开展。孵化过程中常常观察到海水青鳉胚胎可以正常发育至后期，但由于壳上附着物过厚，导致仔稚鱼仅仅尾部钻出，头部卡在壳内，最终缺氧死亡。

目前，关于海水青鳉受精卵孵化的专利主要有两个，即“一种青鳉鱼高效繁殖及孵化方法(公告号：105900879A)”和“一种循环水挂网片孵化海水青鳉受精卵的方法(公告号：106172131A)”。前者通过设计了一款孵化箱，设置了1个控制仓和4个幼鱼仓，通过将鱼卵在不同鱼仓中培育，最终获取仔稚鱼。后者则通过将受精卵挂至网片上，然后放入循环水系统进行孵化。这两种孵化方法可以有效节水并获得仔稚鱼，但无论哪种方法都不可避免受精卵在孵化后期发黑、加厚、死亡。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于提供了一种海水青鳉受精卵孵化方法，本发明方法简单、高效，并能保持其较高的洁净度，便于胚胎学实验观察和显微注射等实验操作。

本发明所采用的技术解决方案如下：

一种海水青鳉受精卵孵化方法，所述方法具体如下：

(1)受精卵孵化的理化条件

温度26-28℃，湿度40-60％，光强80-125μmol·m^-2·s^-1，光暗比为14：10；

(2)盐度梯度稀释受精卵孵化过程

挑选正常受精的受精卵，将受精卵移至孵化容器中，用新鲜海水冲洗以去除受精卵上吸附的杂质，用盐度30±1‰的海水进行孵化，孵化密度在1-3egg/mL；

海水孵化24h后，将受精卵移至另一容器中继续孵化，孵化海水盐度调至20±1‰；

再次孵化24h后，将受精卵移至另一容器中进一步孵化，孵化海水盐度降为10±1‰；

孵化24h后，将受精卵移至另一容器静止孵化，此时的孵化水体为淡水，盐度为1‰；

在淡水中孵化至10-11天，观察到胚体在受精卵内有明显的翻转现象时，将受精卵快速移回至盐度10±1‰的海水中孵化，孵化4h后移至盐度20±1‰的海水中孵化，孵化4h后再次移至盐度30±1‰的海水中孵化，直至仔鱼破膜而出。

本发明与现有技术相比的有益效果：