[发明专利]生产物的制造方法

说明书

一种生产物的制造方法，其包括：培养容纳于培养容器中的细胞悬浮液中所包含的生产生产物的细胞的工序；从培养容器提取细胞悬浮液，使用分离膜并通过切向流过滤方式进行分离的分离处理工序；使返回液返回到培养容器中的工序；向培养容器内供给新鲜培养基的工序；及回收生产物的工序，相对于活细胞浓度Nc、分离膜孔径Dp、分离膜过滤面积S及分离膜一次侧流路体积Vf，细胞悬浮液中的粒子尺寸为8Dp以上且30Dp以下的除活细胞以外的微粒子的个数密度Nd满足Nc≤Nd≤S/(32×π×Vf×Dp²)。

技术领域

本发明涉及一种由细胞生产的生产物的制造方法。

背景技术

已知有为了制造生物医药品等而通过过滤而回收细胞培养液中所包含的培养产物的方法。

作为与培养产物的过滤相关的技术，例如，在日本特开2016-054686号公报中公开有培养产物的回收方法，该方法在产生培养产物的细胞的培养中，回收培养液中所包含的培养产物，所述方法包括：B.将培养液输送至过滤膜的工序；C.以沿与过滤膜表面平行的方向往返运动的方式改变培养液的流动并且进行过滤而获得渗透液的交替流过滤工序；D.使未渗透过滤膜而残留的培养残液返液的工序；及G.从渗透液回收培养产物的工序，作为B工序中所使用的过滤膜，使用培养液侧表面的平均孔径为20μm以上且100μm以下的多孔膜或培养液侧表面的直径成为小于20μm的孔的比例为培养液侧表面的所有孔的50％以下的多孔膜。

并且，在日本特开2009-045019号公报中公开有蛋白质的制造方法，该方法通过分离膜过滤在培养液中生产蛋白质的动物细胞的培养液，从滤液回收生产物即蛋白质，并且将未过滤液在培养液中保持或回流，且通过将新鲜培养基追加于培养液的连续过滤培养而制造蛋白质，所述方法中，作为分离膜使用具有平均细孔直径为0.01μm以上且小于1μm的细孔的多孔性膜，并且在0.1kPa至20kPa的范围的膜间差压的条件下进行过滤处理。

并且，作为在细胞培养中获得高活细胞密度的方法，在日本特开2016-039817号公报中公开有用于包含细胞培养培养基及细胞的细胞培养物的基于连续灌流培养培养细胞的方法，所述方法中，细胞培养基例如以0.01～0.3nL/细胞/天的比例添加于细胞培养物中，细胞培养物经过包含中空纤维的过滤模块上循环，其结果，产生具有比细胞培养物低的细胞密度的液体的流出，且过滤模块内的流动为交替切线流。

发明内容

发明要解决的技术课题

在生物医药品等细胞生产物的制造中，为了提高生产物的生产效率，正在使用连续地过滤及排出培养液，另一方面，将包含营养成分的新鲜的培养基连续地供给至培养槽的灌流培养方法。

在灌流培养方法中，能够以高浓度培养细胞，但另一方面，若将细胞浓度设为高浓度，则随着继续进行培养而通过分离膜的生产物渗透率降低，从而存在生产物回收量减少的问题。日本特开2016-054686号公报、日本特开2009-045019号公报及日本特开2016-039817号公报中所记载的技术均无法应对这种问题。

本发明所涉及的实施方式要解决的课题在于提供一种在通过细胞培养生产生产物并使用分离膜从培养液分离生产物的生产物的制造方法中，尤其在以高浓度培养细胞的情况下，也能够将通过分离膜的生产物渗透率保持为较高的生产物的制造方法。

用于解决技术课题的手段

在用于解决上述课题的手段中包含以下方式。

＜1＞一种生产物的制造方法，其包括：培养容纳于培养容器中的细胞悬浮液中所包含的生产生产物的细胞的工序；

从培养容器提取细胞悬浮液，使用分离膜，并通过切向流过滤方式分离成具有比细胞悬浮液高的细胞浓度的返回液及具有比细胞悬浮液低的细胞浓度且包含生产物的渗透液的分离处理工序；

使返回液返回到培养容器中的工序；