[发明专利]一种同时测定酱油大曲中性和酸性蛋白酶的快捷提取法

权利要求书

1.一种同时测定酱油大曲中性和酸性蛋白酶的快捷提取法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将大曲粉碎，然后加入无菌水中，进行恒温水浴震荡处理，得到提取液；

(2)将步骤(1)所述提取液用纱布过滤，然后加入无菌水定容，得到粗酶液，低温保存备用；

(3)往步骤(2)所述粗酶液中加入缓冲液进行稀释，得到稀释酶液；

(4)用福林酚法测定步骤(3)所述稀释酶液中的中性蛋白酶、酸性蛋白酶的浓度；

(5)以酪氨酸标准溶液的浓度和OD660吸光值绘制标准曲线，根据标准曲线计算得到所测定样品粗酶液的中性蛋白酶、酸性蛋白酶的活力。

2.根据权利要求1所述的同时测定酱油大曲中性和酸性蛋白酶的快捷提取法，其特征在于，步骤(1)所述无菌水的制备，包括：将蒸馏水煮沸3-10min后，再通过自然冷却或冰水浴冷却至25-45℃，得到所述无菌水。

3.根据权利要求1所述的同时测定酱油大曲中性和酸性蛋白酶的快捷提取法，其特征在于，步骤(1)所述大曲与无菌水的质量体积比为1-4：25-35g/mL。

4.根据权利要求1所述的同时测定酱油大曲中性和酸性蛋白酶的快捷提取法，其特征在于，步骤(1)所述大曲为黑曲霉AN1大曲、黑曲霉AN2大曲、米曲霉AO1大曲及米曲霉AO2大曲中的一种。

5.根据权利要求1所述的同时测定酱油大曲中性和酸性蛋白酶的快捷提取法，其特征在于，步骤(1)所述恒温水浴震荡处理的温度为35-45℃，恒温水浴震荡处理的时间为1-2h，恒温水浴震荡处理的转速为100-150r/min。

6.根据权利要求1所述的同时测定酱油大曲中性和酸性蛋白酶的快捷提取法，其特征在于，步骤(2)所述纱布的孔径大小为100-200目。

7.根据权利要求1所述的同时测定酱油大曲中性和酸性蛋白酶的快捷提取法，其特征在于，步骤(2)所述低温保存备用的温度为-4～4℃，低温保存备用的时间为0-4天。

8.根据权利要求1所述的同时测定酱油大曲中性和酸性蛋白酶的快捷提取法，其特征在于，步骤(2)所述提取液与定容的无菌水的体积比为1：1.5-2.5。

9.根据权利要求1所述的同时测定酱油大曲中性和酸性蛋白酶的快捷提取法，其特征在于，步骤(3)所述缓冲液为磷酸缓冲液或乳酸-乳酸钠缓冲液；当步骤(4)中需要测定稀释酶液中的中性蛋白酶浓度时，步骤(3)所述缓冲液为磷酸缓冲液，所述磷酸缓冲液的pH为7.0-7.5；当步骤(4)中需要测定稀释酶液中的酸性蛋白酶浓度时，步骤(3)所述缓冲液为乳酸-乳酸钠缓冲液，所述乳酸-乳酸钠缓冲液的pH为3.0-3.5；所述粗酶液与缓冲液的体积比为1：2-5。