[发明专利]一种提高忍冬遗传转换效率的方法

权利要求书

1.一种提高忍冬遗传转换效率的方法，其特征在于，包括如下步骤，

S1、获得用于侵染的外植体；

S2、获得含有目标基因的重组农杆菌菌液，使用该菌液侵染外植体；

S3、培养侵染后的外植体，得到目标基因稳定表达的转基因植株。

2.根据权利要求1所述的一种提高忍冬遗传转换效率的方法，其特征在于，S1中，所述外植体获得方法如下，选择丁香叶忍冬的茎段的腋芽，洗洁精清洗后用清水冲洗至无泡沫，在超净台中先用60-70％的酒精浸1-2分钟，无菌水冲洗2-3次，用质量浓度为5-10％的次氯酸钠溶液消毒3-5分钟，用无菌水洗2-3次，放入初代启动培养基中诱导腋芽萌发，待腋芽长至3-4cm时，移植到继代培养基中增值，取继代培养3-4w的无菌苗叶片作为外植体。

3.根据权利要求1所述的一种提高忍冬遗传转换效率的方法，其特征在于，S2中，所述重组农杆菌为带有gus基因的EHA105农杆菌，转化所用载体为pCAMBIA2301。

4.根据权利要求1所述的一种提高忍冬遗传转换效率的方法，其特征在于，S2中，侵染的具体方法为，将外植体置于分化培养基中预培养2-3天，用浓度为OD₆₀₀＝0.3-0.5的重组农杆菌菌液侵染外植体，侵染时间为4-20分钟。

5.根据权利要求1所述的一种提高忍冬遗传转换效率的方法，其特征在于，所述步骤S3的具体方法为将侵染后的外植体叶正面朝下转接到分化培养基上，黑暗条件下培养1-2天，叶正面朝上转接到含有15-30mg/L的卡那霉素和400-800mg/L的头袍霉素的筛选培养基中培养，培养条件为温度25±1℃、光照时间10-15h、光照强度1000-2000Lx。

6.根据权利要求2所述的一种提高忍冬遗传转换效率的方法，其特征在于，所述初代启动培养基的配方为：以MB为基本培养基，并添加6-BA 1mg/L、IAA 0.8mg/L，调节pH至5.6；

所述继代培养基的配方为：以MB为基本培养基，并添加6-BA 0.5mg/L、IAA 0.8mg/L，调节pH至5.6。

7.根据权利要求4或5中所述的一种提高忍冬遗传转换效率的方法，其特征在于，所述分化培养基的配方为：以MB为基本培养基，并添加6-BA 1mg/L、KT 2mg/L、NAA 0.1mg/L、调节pH至5.8。

8.根据权利要求5所述的一种提高忍冬遗传转换效率的方法，其特征在于，所述筛选培养基的配方为：以MB为基本培养基，并添加DCR 2.0mg/L、TDZ 0.05mg/L、NAA 20g/L，pH6.0。