[发明专利]样本裂解和PCR反应组合物

说明书

本发明提出了样本裂解和PCR反应组合物，该组合物包括：第一组分，所述第一组分包括EDTA，EGTA，十二烷基硫酸钠，皂苷，蛋白酶K，聚乙二醇3350，Tris‑HCl，水；和/或第二组分，所述第二组分包括甘露醇，蔗糖，氯化钾，氯化镁，牛血清白蛋白，dNTP，聚氧乙烯十二烷醚，HEPES，DNA聚合酶，反转录酶和RNA酶抑制剂，水。该组合物中的第一组分可以有效用于样本的裂解和核酸的提取，第二组分可以有效用于PCR扩增反应。该组合物中第一组分与第二组分的联合使用，可以使样本的裂解、核酸的提取以及荧光定量PCR试剂的配制无需专业人士即可完成，降低了对操作人员的技术要求，同时PCR扩增效果优异。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体地，本发明涉及样本裂解和PCR反应组合物，更具体地，本发明涉及组合物以及冻干粉。

背景技术

现有的荧光定量PCR反应一般主要分4个步骤：首先进行样本的裂解和核酸的提取，之后进行荧光定量PCR反应试剂的配制，随后将样本加入PCR反应体系中，最后再进行上机检测。

发明内容

本申请是基于发明人对以下事实和问题的发现和认识作出的：

发明人发现，一方面，在样本提取期间使用的试剂苯酚、氯仿、盐酸胍、乙醇、异硫氰酸胍等不仅对人体有害，严重的甚至致癌；而且有些试剂是易燃品，对实验室环境和安全风险控制的要求较高；另外，这些试剂也容易造成大气和水源的污染。另一方面，荧光定量PCR试剂的配制和分装要求在标准的试剂准备间进行，以防造成样本污染，且配置和分装的操作复杂，需要特定培训后的人员才可以进行。基于上述问题，发明人研究开发了一种组合物，该组合物中的第一组分可以有效用于样本的裂解和核酸的提取，第二组分可以有效用于PCR扩增反应，该第一组分与现有试剂相比，毒性和污染性显著降低，安全性、稳定性显著提高，对运输和储存有利，且对样本的要求降低；该第二组分与现有技术相比，稳定性显著提高，对运输和储存有利，且降低了对实验环境的要求；第一组分与第二组分的联合使用，可以使样本的裂解、核酸的提取以及荧光定量PCR试剂的配制无需专业人士即可完成，降低了对操作人员的技术要求，同时PCR扩增效果优异。

为此，在本发明的第一方面，本发明提出了一种用于PCR反应的组合物。根据本发明的实施例，所述组合物包括：第一组分，所述第一组分包括金属离子螯合剂，十二烷基硫酸钠(SDS)，皂苷(saponin)，蛋白酶K(proteinase K)，聚乙二醇3350(PEG 3350)，Tris-HCl，水；和/或第二组分，所述第二组分包括甘露醇，蔗糖，氯化盐，牛血清白蛋白(BSA)，dNTP，聚氧乙烯十二烷醚(Brij 35)，HEPES，DNA聚合酶，反转录酶和RNA酶抑制剂，水。在一些实施例中，所述金属离子螯合剂为EDTA和EGTA。在一些实施例中，所述氯化盐为氯化钾和氯化镁。根据本发明实施例的组合物中的第一组分配合其他仪器的加热功能可以有效用于样本的裂解和核酸的提取，第二组分可以有效用于PCR扩增反应，发明人发现，所述第一组分与现有试剂相比，毒性和污染性显著降低，安全性显著提高，且利用第一组分裂解样本后得到的混合液不需要再单独进行纯化，即可直接用于后续的PCR反应，对样本的要求降低；所述第二组分与现有技术相比，稳定有效，对运输和储存有利，且降低了对运输和储存温度的要求；第一组分与第二组分的联合使用，可以使样本的裂解、核酸的提取以及荧光定量PCR试剂的配制无需专业人士即可完成，降低了对操作人员的技术要求，同时PCR扩增效果优异。

根据本发明的实施例，上述组合物还可进一步包括如下附加技术特征至少之一：