[发明专利]纳米抗体I22在重组人干扰素α2b检测中的应用

说明书

本发明纳米抗体I22在重组人干扰素α2b检测中的应用，通过一系列实验研究证明在重组人干扰素α2b检测中纳米抗体I22比商品化的单克隆抗体更灵敏，纳米抗体I22与胶体金标记技术相结合，检测重组人干扰素α2b的检测限可达到1μg/mL。首次开发的胶体金试纸条实现了快速检测，将原本耗时两天的免疫鉴别试验缩短为几分钟完成的快速检测，实现了对重组人干扰素α2b快速检测的初步应用。

技术领域

本发明涉及纳米抗体对重组人干扰素α2b的检测，特别是实现纳米抗体对重组人干扰素α2b的快速检测应用。

背景技术

我国是肝炎频发大国。重组人干扰素是目前国际上公认的有效治疗肝炎的药物，对于基因重组药物来说，药品的质量控制是我们关注的焦点，其中药品的鉴别实验是药品定性检测的主要依据。

对于重组人干扰素来说，根据《中国药典》2015版三部，对重组人干扰素α2b制品进行鉴别实验，主要采用免疫学检测方法(免疫斑点或免疫印迹)。此方法周期长，成本高，抗体间有批次的差异且全过程需要低温运输与保存，不利于快速检测。中国专利“一种抗干扰素α-2b纳米抗体及其应用”(申请号201710965143.X，公布号CN107857816A，公布日2018.03.30)筛选出的纳米抗体I22，采用原核表达体系进行生产，降低了生产成本，全过程无需冷链运输，且稳定性高、特异性高、分子量小和可大规模生产，但是，目前尚缺乏对其在重组人干扰素α2b检测中的进一步研究，因此尚不具备临床应用。

发明内容

本发明通过一系列实验研究证明在重组人干扰素α2b检测中纳米抗体I22比商品化的单克隆抗体更灵敏。纳米抗体I22的产量约为45.7mg/L，经镍柱纯化得到纯度100％，降低了生产成本。本发明采用纳米抗体I22与胶体金试纸条结合方式对重组人干扰素α2b实现快速检测。首次开发出纳米抗体I22的胶体金标记胶体金试纸条，实现了快速检测，将原本耗时两天的免疫鉴别试验缩短为几分钟完成的快速检测，实现了纳米抗体I22在快速检测方面的初步应用。

构建的菌株pET28a-His-I₂₂-His进行了诱导表达，得到了分子量符合预期的蛋白，且能与重组人干扰素α2b进行结合。产量约为45.7mg/L，纯度为100％。

经全柱成像毛细管测得纳米抗体I22的等电点约8.20，N端测序测得氨基酸数目与理论结果一致，质谱测得分子量为14226.80Da，与理论分子量14226.77Da一致。

证明纳米抗体I22与商品化的单克隆抗体对重组人干扰素α2b制品的生物活性没有影响，多克隆抗体对重组人干扰素α2b制品生物活性有影响。

纳米抗体I22应用于Western Blot实验中，且对重组人干扰素α2b制品有特异性，对重组人干扰素α2b制品中的辅料人血白蛋白没有结合作用。

将纳米抗体I22与商品化的单克隆抗体(抗重组人干扰素α2b)进行比较分析，证明纳米抗体I22的检测限约为31.25ng，同等实验条件下商品化的单克隆抗体的检测限约为125ng。

纳米抗体I22应用于半定量检测重组人干扰素α2b的含量，精确度高，实验结果准确。

本发明具有如下积极的技术效果：通过一系列实验研究证明在重组人干扰素α2b检测中纳米抗体I22比商品化的单克隆抗体更灵敏，纳米抗体I22与胶体金标记技术相结合，检测重组人干扰素α2b的检测限可达到1μg/mL。首次开发的胶体金试纸条实现了快速检测，将原本耗时两天的免疫鉴别试验缩短为几分钟完成的快速检测，实现了对重组人干扰素α2b快速检测的初步应用。

附图说明

现结合附图和实施例对本发明的内容作进一步说明。

图1显示了构建的菌株pET28a-His-I₂₂-His。