[发明专利]人类BCR-ABL基因T315I突变检测与分析

权利要求书

1.一种用于人类BCR/ABLT315I突变的试剂盒，包括PCR反应液、标准品、阴性质控，其中，所述PCR反应液包括：四对引物、四个探针、dNTPs、DNA聚合酶、MgCl₂。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述引物和探针包括：

3.权利要求1所述试剂盒的制备方法，包括：分析BCR-ABL基因序列，结合ARMS-PCR方法的特点，选取含有突变位点的一段长132的序列作为扩增片段，设计引物及探针。

4.权利要求1所述试剂盒的用途，包括：对CML和Ph+ALL耐药性的筛查及临床科学用药具有指导意义，其中BCR-ABL融合基因的ABL T315I突变在临床上被用作CML和Ph+ALL药物治疗指导的主要指针。

5.权利要求1所述试剂盒的测试方法，包括：

1)将试剂盒内所有组分冰上融化，混匀并短暂离心，置于冰上；

2)往含有样品的PCR反应管加入反应液，反应体系的配制如下：

名称	用量
PCR反应液(mix)	18μL
DNA或质控品	2μL
总体积	20μL

每次检测反应都需要分别设置标准品对照和阴性质控品对照；

3)依次加好样后，盖上PCR反应管盖并离心，使所加试剂聚集到管底，放入仪器样品槽；

4)将PCR反应管放入扩增仪样品槽，按对应顺序设置标准品、阴性对照及样本名称；

5)荧光检测通道选择：选择FAM通道；内参选择HEX通道。参比荧光设置为ROX；

6)荧光定量PCR反应条件；

第一步：95℃5min，1个循环，

第二步：95℃25s，63℃20s，72℃20s，17个循环，

第三步：93℃25s，57℃35s，72℃20s，50个循环；其中，在第三步时，收集荧光信号。