[发明专利]一种乳酸菌菌种长期保藏方法在审
| 申请号： | 201811353861.2 | 申请日： | 2018-11-14 |
| 公开（公告）号： | CN109182231A | 公开（公告）日： | 2019-01-11 |
| 发明（设计）人： | 梁金钟;肖雯娟;林凤祥 | 申请（专利权）人： | 哈尔滨美华生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12N1/04;C12R1/245;C12R1/23;C12R1/225;C12R1/46;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京精金石知识产权代理有限公司 11470 | 代理人： | 张黎 |
| 地址： | 150018 黑龙江省*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 保藏 甘油 棉球 乳酸菌 乳酸菌菌种 聚谷氨酸 离心管 配制 聚谷氨酸溶液 乳酸菌菌种液 乳酸菌种液 无菌注射器 低温保藏 混合溶液 菌种活性 原始菌种 浸入 存活率 混合液 灭菌 菌液 菌种 吸附 制备 制作 备用 恢复 装满 应用 | ||
1.一种乳酸菌菌种长期保藏方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)配制γ-聚谷氨酸溶液，将γ-聚谷氨酸溶液加入到甘油中，混合均匀制成γ-聚谷氨酸-甘油混合溶液，灭菌备用；
(2)将脱脂棉制作棉球，并将其置于玻璃培养皿中，玻璃培养皿外用铝箔纸或牛皮纸包裹，灭菌备用；
(3)培养待保藏的乳酸菌菌种，得到乳酸菌菌种液；
(4)用无菌镊子夹取步骤(2)中制备的无菌棉球浸入步骤(3)培养好的乳酸菌种液中，使棉球吸附充足，然后将吸附有菌液的棉球置于离心管中，再用无菌注射器注入步骤(1)中配制的γ-聚谷氨酸-甘油混合液至装满离心管，得到待保藏样品；
(5)将步骤(4)得到的待保藏样品低温保藏。
2.根据权利要求1所述的保藏方法，其特征在于：步骤(1)中所述的γ-聚谷氨酸溶液中γ-聚谷氨酸的重量百分比为3-5％。
3.根据权利要求1所述的保藏方法，其特征在于：步骤(1)中制备的γ-聚谷氨酸-甘油混合溶液中γ-聚谷氨酸溶液与甘油的体积比为5-25：75-95。
4.根据权利要求1所述的保藏方法，其特征在于：步骤(1)配置的γ-聚谷氨酸-甘油混合溶液中还加入稳定剂，所述的稳定剂为质量比为2-5:1的十二烷基苯磺酸钠和蛋黄卵磷脂。
5.根据权利要求4所述的保藏方法,其特征在于：所述的稳定剂的加入量为每100mLγ-聚谷氨酸-甘油混合溶液中加入2-10g。
6.根据权利要求1所述的保藏方法，其特征在于：步骤(1)配置的γ-聚谷氨酸-甘油混合溶液中还加入了质量比为3:1的精氨酸和苯丙氨酸。
7.根据权利要求6所述的保藏方法,其特征在于：所述的精氨酸和苯丙氨酸的加入总量为每100mLγ-聚谷氨酸-甘油混合溶液中加入5-20g。
8.根据权利要求1所述的保藏方法，其特征在于：步骤(2)中所述的棉球的直径为2-5mm。
9.根据权利要求1所述的保藏方法，其特征在于：步骤(3)中所述的乳酸菌菌种为干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、两歧双歧杆菌、嗜酸乳杆菌或嗜热链球菌中的任意一种。
10.根据权利要求1所述的保藏方法，其特征在于：步骤(3)中所述的培养时间为5-7小时，对数生长期。
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