[发明专利]一种百合离体快速繁殖方法

说明书

本发明涉及农业快速繁殖技术领域，具体涉及一种百合离体快速繁殖方法。利用百合幼嫩带腋芽的茎尖作为外植体，直接再生大量不定芽，通过调节培养基基质和光期，继而得到再生苗，与使用鳞片作为外植体进行组织培养相比，再生率高，降低了病毒的交叉污染率，而且提高了百合茎尖的诱导率，缩短了再生周期。

技术领域

本发明涉及农业快速繁殖育苗技术领域，具体涉及一种百合离体快速繁殖方法。

背景技术

百合是百合科百合属的一种多年生草本植物，不仅是世界著名的观赏花卉，而且具有食用、药用价值。传统的百合繁殖方法具有繁殖系数小、多代繁殖种性易退化等缺点，对百合生产的数量和质量造成了一定的影响。组培技术的应用能够克服以上缺点，并且提高繁殖速度，是今后生产生产中一种有效的繁殖途径。

百合鳞茎是最为常用的快速繁殖的组培材料，以鳞茎为外植体进行再生虽然取材相对较方便，但由于百合在开放条件下生长，种植在土壤中的百合鳞茎不可避免地被病毒侵染，如常见的百合无症病毒Lily symptomless virus(LSV)、黄瓜花叶病毒Cucumbermosaic virus(CMV)、百合斑驳病毒Lily mottle virus(LMoV)、郁金香碎花病毒Tulipbreaking virus(TBV)和百合丛簇病毒Lily rosettle virus(LRV)。被病毒侵染的百合鳞茎会随着鳞茎芽眼萌发长成植株的生长过程，病毒会在百合植株体内进行复制繁殖，导致鳞茎带菌严重，在组培时常常因鳞茎消毒不彻底，导致培养过程中反复污染现象严重，增大工作量，而且以鳞片为外植体再生效率并不十分理想。

发明内容

为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本发明提供一种百合离体快速繁殖方法，本发明的方法再生效率增高，污染率降低，通过调节培养基条件提高了诱导率，缩短了再生周期，此再生体系适用于多个百合品种。

本发明是通过以下的技术方案实现的，本发明的百合离体快速繁殖方法，包括如下步骤：选取优质、健康的百合作为植株，剪取百合植株茎尖作为外植体，进行再生培养，获得百合幼苗。

优选地，一种百合离体快速繁殖方法，包括如下步骤：

(a)剪切百合植株茎尖：选取茎粗0.5～1cm且带腋芽的百合植株，剪切长度为2～8cm的百合植株茎尖作为外植体，剪切时，每段留1个节，节下留1～2cm，剪成斜口，斜面与水平面夹角为50±2°，消毒；

(b)诱导生长：将步骤(a)中得到的外植体的基部，在萘乙酸水溶液和/或吲哚丁酸水溶液中浸泡22～24h，平放在MS固体培养基上诱导不定芽丛的生长培养，获得带有不定芽丛的组织块；

(c)伸长培养：纵向分切组织块，置于芽伸长培养基上培养；

(d)生根培养：待步骤(c)中的组织块上的不定芽伸长至2～4cm时，切分，放入生根培养基中培养，获得百合幼苗。

所述的消毒是：除去百合茎部泥土和坏组织，用流动水冲洗除去外部污染物，剥除外层茎叶，置于酒精度为70％酒中浸泡5-10秒，用质量浓度为1.0％的次氯酸钠溶液，喷雾消毒10～20分钟，之后用无菌水冲洗3～5次，即可。

所述的步骤(b)，萘乙酸水溶液和/或吲哚丁酸水溶液中，萘乙酸与吲哚丁酸在水溶液中的总质量浓度为10±1mg·L-1。

所述的步骤(b)中，所述MS固体培养基为MS+BA 2.0mg/L+NAA1.0mg/L，pH 5.8，蔗糖30g/L，琼脂5g/L。

所述的诱导生长，在MS固体培养基上诱导不定芽丛的生长培养时，温度为15℃，光照：20光期/4暗期。

所述的芽伸长培养基为MS+BA0.5mg/L+NAA1.0mg/L，pH5.8，蔗糖30g/L，琼脂5g/L；