[发明专利]一种重组枯草芽孢杆菌及其应用

权利要求书

1.一种重组枯草芽孢杆菌在降解多肽类抗生素中的应用，其特征在于所述重组枯草芽孢杆菌是将SEQ ID NO.1所示基因片段与线性化pWBUC01载体连接后转入枯草芽孢杆菌获得的；所述多肽类抗生素为多粘菌素E。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis ）WB800。

3.如权利要求1-2之一所述的应用，其特征在于所述重组枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）WB800/pWBUC01-apr，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期2017年11月27日，保藏编号为：CCTCC NO: M 2017732，保藏地址为中国武汉，武汉大学，邮编430072。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述应用方法为：将重组枯草芽孢杆菌经发酵培养获得的湿菌体用pH为5~10的磷酸缓冲溶液清洗后悬浮配制成OD₆₀₀为0.4~5.0的菌悬液；将菌悬液以体积浓度2-16%的接种量接种至含终浓度为5000~15000U/mL多粘菌素E的LB液体培养基中，在37℃、50~250r/min条件下培养，获得多粘菌素E降解的培养液；所述LB液体培养基组成为：酵母粉 1.0~10.0 g/L、胰蛋白胨 2.0~25.0 g/L、氯化钠2.0~25.0 g/L，溶剂为去离子水，pH 5~10。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述湿菌体按如下方法制备：将重组枯草芽孢杆菌接种至含5~100μg/mL卡那霉素LB固体培养基，于37℃倒置培养12~72h后，挑选单菌落接种在LB液体培养基中，37℃、50~250r/min培养12~72h，获得种子液；随后按体积浓度2~16%的接种量接种至LB液体培养基，37℃、50~250r/min培养12~72h，取培养结束后的菌液在4000~12000r/min的转速下离心2~20min后，弃上清液，收集湿菌体；LB固体培养基终浓度组成：酵母粉 1.0~10.0 g/L、胰蛋白胨 2.0~25.0 g/L、氯化钠2.0~25.0 g/L，琼脂15.0~25.0g/L，溶剂为去离子水，pH 5~10。

6.一种重组枯草芽孢杆菌在修复多肽类抗生素污染水体中的应用，其特征在于所述重组枯草芽孢杆菌是将SEQ ID NO.1所示基因片段与线性化pWBUC01载体连接后转入枯草芽孢杆菌获得的；所述多肽类抗生素为多粘菌素E。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述的应用是将重组枯草芽孢杆菌经发酵培养获得的湿菌体用pH为5~10的磷酸缓冲溶液清洗后悬浮配制成OD₆₀₀为0.4~5.0的菌悬液；将菌悬液以体积浓度2-16%的接种量接种至多肽类抗生素污染水体中，在30℃、50~250r/min条件下培养，获得多肽类抗生素降解的培养液。

8.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述多肽类抗生素污染水体中多肽类抗生素终浓度为5000~20000U/mL。