[发明专利]一种双水相萃取分离纯化铁皮石斛多糖的方法

说明书

本发明属植物活性成分提取技术领域，为解决石斛多糖提取中存在使用有安全隐患的有机溶剂作萃取剂纯化混杂在多糖中蛋白质的问题，提供一种双水相萃取分离纯化铁皮石斛多糖的方法。铁皮石斛茎秆烘干，粉碎；按料液比1:50溶于活性水中，超声波处理溶液2次；2次超声浸提液合并，浸提液用乙醇沉淀；获得的沉淀用浓度为80%乙醇加热溶解，用PEG/硫酸铵混合溶液去除混在粗多糖中的蛋白质。避免使用有毒的氯仿纯化粗多糖，纯度可达90‑95%。提取率是常规热水浸提法和超声波法提取率的177‑187%。提取得到的多糖具有明显的清除DPPH自由基能力、清除羟基自由基能力，具有显著的抗氧化能力。为其它植物多糖的制备方法提供借鉴。

技术领域

本发明属于植物活性成分提取技术领域，具体涉及一种双水相萃取分离纯化铁皮石斛多糖的方法。

背景技术

石斛是兰科（Orchidaceae）石斛属Dendrobium多年生草本植物，是一种名贵稀有的中药材，素有“人间仙草”之称。医学经典《道藏》中称铁皮石斛为中华九大仙草之首，民间将其称为救命仙草。铁皮石斛Dendrobium officinale，俗称铁皮枫斗，为我国特有的名贵药材。《本草纲目》、《中药大词典》等多部中国古代医学著作中都有铁皮石斛入药的记载。现代生物技术分析表明，石斛多糖和生物碱是石斛兰中最重要的药用有效成分。

石斛多糖具有较好的保健功能，有抗氧化、缓解疲劳、提高免疫力等功效。孙静平等利用放射性射线照射小鼠造成小鼠放射性损伤，通过喂食铁皮石斛颗粒探究铁皮石斛颗粒修复急性放射性损伤的机制。结果表明石斛颗粒能够提高DNA在骨髓中的含量和淋巴细胞的转化能力。促使受射线照射小鼠淋巴细胞生成IL-2，调节CD4⁺、CD8⁺细胞亚型保护T 淋巴细胞。从而提高小鼠的免疫力。李莉娜通过构建半乳糖诱导小鼠衰老模型，探究铁皮石斛多糖的抗衰老作用，通过对模型小鼠以灌胃的方式给药铁皮石斛多糖溶液，连续5周给药后，对模型小鼠的学习能力进行检测，连续6周给药后检测小鼠的生化指标。结果显示铁皮石斛多糖能够改善小鼠的记忆功能，肝脏组织、脑组织、血液中SOD和GSH-PX活性增高，从而说明铁皮石斛多糖具有抗衰老的作用。郭婕等利用不同浓度梯度的铁皮石斛茶制剂溶液给小鼠灌胃，给药30天后测定小鼠的各项生化指标，结果显示铁皮石斛茶具有缓解疲劳的功效。

目前铁皮石斛多糖的提取方法主要有：传统热水浸提法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法、酶辅助提取法、闪提法、湿法超微粉碎辅助提取法、超临界辅助提取法等。生产上常用的方法一是传统热水浸提法，二是超声波辅助热水浸提法。传统热水浸提法操作简单，对相关操作人员及设备仪器要求不高。李程程等通过正交实验优化传统热水浸提法提取提皮石斛多糖工艺，通过优化得到的最佳热水浸提工艺为：热水浸提温度为90℃、铁皮石斛质量与水的体积比为1:40，重复提取3次，铁皮石斛多糖的提取率为24.6%。超声波作为一种简便、有效的辅助提取方法在天然活性成分提取中得到广泛应用，借助超声波的空化作用和机械作用促进有效成分的溶出。叶余原通过运用超声波辅助提取的方法对铁皮石斛多糖的提取工艺进行优化，得到超声波辅助提取铁皮石斛多糖的最佳工艺：最佳超声波频率为45 KHz，最佳超声波水提提取温度为50℃，提取时间为1.5 h，铁皮石斛质量与水的体积比为1:30，此条件下铁皮石斛多糖的提取率为15.3%。石斛多糖提取中，为了得到纯多糖，需要在制得粗多糖后用Sevag 法去除蛋白质杂质。

发明内容

本发明为了解决现有石斛多糖提取中存在着使用有安全隐患的有机溶剂作为萃取剂纯化混杂在多糖中蛋白质的问题，提供了一种双水相萃取分离纯化铁皮石斛多糖的方法。