[发明专利]基于液质联用的红花抗硬皮病代谢组学分析方法有效

专利信息
申请号: 201810187048.6 申请日: 2018-03-07
公开(公告)号: CN108508123B 公开(公告)日: 2020-05-12
发明(设计)人: 吕军影;李凯;刘霞;阙铁生;谢爱泽;赵亮娟 申请(专利权)人: 广西医科大学第一附属医院
主分类号: G01N30/86 分类号: G01N30/86
代理公司: 北京远大卓悦知识产权代理事务所(普通合伙) 11369 代理人: 靳浩
地址: 530022 广西壮族自治区南*** 国省代码: 广西;45
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摘要:
搜索关键词: 基于 联用 红花 硬皮病 代谢 分析 方法
【说明书】:

发明公开了基于液质联用的红花抗硬皮病作用机制代谢组学分析方法,包括以下步骤:1)将健康小鼠分成对照组、硬皮病模型组和红花治疗组三个实验组,硬皮病模型组和红花治疗组小鼠每日皮下注射博来霉素溶液复制小鼠硬皮病模型,红花治疗组小鼠每日灌喂红花水煎液进行治疗,造模28天,并以生理改变和病理改变判定造模是否成功;2)造模成功后,取得三个实验组小鼠的血清样本,采用液相色谱质谱法检测,获得三个实验组小鼠血清样本的指纹图谱;3)采用多元统计学分析指纹图谱得到差异代谢物,并鉴定得到生物标记物。本发明的方法获得了红花抗硬皮病代谢组学的生物标记物,分析并验证红花抗硬皮病的“多成分”、“多靶点”作用机制。

技术领域

本发明属于中药学研究领域,尤其涉及一种基于液质联用的红花抗硬皮病作用机制代谢组学分析方法。

背景技术

传统中医药是华夏民族的瑰宝,在中华民族五千年生生不息的历史长河中为本民族的健康繁衍起着保驾护航的作用,中药具有多成分多靶点的特点从人体整体的系统层面发挥作用是中医药精髓。但是,由于中药药效成分的不确定性和作用机制的整体模糊性,中医药的现代化研究如今遭遇到了巨大的瓶颈。与西药单一成分的形式不同,中药化学成分众多,且在煎煮或炮制过程中,不同成分之间会产生相互作用。多成分作用于生物整体发挥药效的作用机制也比传统的协同作用要复杂得多,这些都给中药作用机制的阐明带来了巨大的难度。

代谢组学(metabolomics)是20世纪90年代中期发展起来的一门新兴学科,是关于生物体系受刺激或扰动后其整体内源性小分子代谢产物(分子量<1000)种类、数量及其变化规律的系统生物学方法,代谢组学基于整体出发,其全局观念与中药的整体调节、综合治疗的作用相通,与中医药整体论的研究思路不谋而合,为中药组方研究提供了崭新的、强有力的技术手段。代谢组学成为研究中药及中药组方作用机制的重要途径。

系统性硬皮病(systemic sclerosis,SSc)是一种病因不明的慢性多系统疾病,以皮肤组织器官纤维化(包括胃肠道、肺脏、心脏和肾脏等)为特征。最后发展至萎缩为特点的自身免疫性疾病。现代医学认为,微血管病变和细胞介导的免疫反应在SSc的发病过程中扮演了重要角色。红花在治疗SSc的中药复方中具有较高的出现频次,且已有研究证实红花对SSc模型动物的真皮厚度及皮肤炎症评分的病理异常,RORγt蛋白、内皮生长因子(VEGF)表达的异常等关键病理机制均具有治疗作用。理论上,红花发挥抗SSc的作用机制应该是“多途径、多成分、多靶点”,但目前仍缺乏有效的实验方法和技术手段进行从系统角度对红花的作用机制进行验证,而代谢组学的产生可为阐明其作用机制提供强大的支持。同时,应用系统理念对红花的抗SSc的作用机制进行全方位的研究,对SSc的发病机制研究和治疗药物的寻找具有重大的意义和前景。

发明内容

本发明有一个目的是通过小鼠皮下注射博来霉素复制小鼠硬皮病模型,提供一种基于液质联用的红花抗硬皮病作用机制代谢组学分析方法,获得红花抗硬皮病代谢组学的生物标记物,用于分析并验证红花抗硬皮病的“多成分”、“多靶点”作用机制。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点,提供了一种基于液质联用的红花抗硬皮病作用机制代谢组学分析方法,包括以下步骤:

1)将健康小鼠分成对照组、硬皮病模型组和红花治疗组三个实验组,硬皮病模型组和红花治疗组小鼠每日皮下注射博来霉素溶液复制小鼠硬皮病模型,对照组给与PBS溶媒同法平行处理,红花治疗组小鼠每日灌喂红花水煎液进行治疗,对照组和硬皮病模型组小鼠均给予等量生理盐水,造模28天,并以生理改变和病理改变判定造模是否成功;

2)造模成功后,分别取得三个实验组小鼠的血清样本,采用液相色谱质谱法检测,获得三个实验组小鼠血清样本的指纹图谱;

3)采用多元统计学分析三个实验组的指纹图谱,得到差异代谢物,并经过数据库鉴定得到生物标记物。

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