[发明专利]使用高通量荧光流式细胞仪进行细胞分选

权利要求书

1.一种确定颗粒的一个或多个特征的方法，所述方法包括：

当颗粒流过流式细胞术系统时用具有彼此偏移一个射频的至少两个光学频率的辐射照射所述颗粒以从所述颗粒引出荧光辐射，

检测来自所述颗粒的所述荧光辐射以生成时间荧光数据，

处理所述时间荧光数据以获得所述颗粒的至少一个特征的估计，其中处理所述时间荧光数据包括：

1)获得所述时间荧光数据的傅里叶变换，并确定所述变换中与所述射频不同的频率以从所述颗粒引出荧光辐射，获得在所述不同频率下的傅里叶变换值之和，并将所述和与预定阈值进行比较；或

2)分析与所述时间荧光数据相关的拍频，以生成颗粒的特征的估计；

生成时间荧光波形并获得对应于所述时间荧光波形的荧光信号的共定位量度；和以下一步或多于一步：

a)将高通或带通滤波器应用于所述时间荧光波形中的至少一个以生成至少一个滤波波形、随后将所述滤波波形逐点相乘以生成合成乘法波形，对所述乘法波形进行积分以获得积分值，并且将所述积分值与预定阈值进行比较以获得所述共定位量度；或

b)将高通或带通滤波器应用于所述时间荧光波形中的至少一个以生成至少一个滤波波形、随后将所述滤波波形逐点相乘以生成合成乘法波形，对所述乘法波形进行积分以获得积分值，从所述积分值中减去背景值并按强度换算合成值以生成最终值，并且将所述最终值与预定阈值进行比较以获得所述共定位量度；并且

基于所述颗粒的至少一个特征的估计生成关于所述颗粒的分选决定。

2.如权利要求1所述的方法，其中在未基于所述时间荧光数据生成荧光图像的情况下执行所述处理步骤。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述至少一个特征与所述颗粒的内部组分相关。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述至少一个特征包括以下中的至少一个：所述颗粒的维度尺寸、所述颗粒沿两个不同维度的尺寸比率、由与所述颗粒相关的两种或更多种标记发射的荧光辐射的共定位、所述荧光辐射的点状度、所述荧光辐射的空间分布的量度、所述颗粒的位置或取向的量度、所述颗粒的偏心率的量度、所述颗粒与参考颗粒相似性的量度、所述颗粒的一个或多个空间傅里叶分量的组合、所述颗粒位于所述照射辐射焦点的程度的量度。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述处理步骤足够快使得与获得所述颗粒的至少一个特征的所述估计相关的延迟时间小于100微秒。

6.如权利要求5所述的方法，其中所述延迟时间小于20微秒。

7.如权利要求1所述的方法，其中所述照射所述颗粒的步骤包括将所述颗粒暴露于光学辐射束，所述光学辐射束包括至少两个小束，每个小束具有所述至少两个光学频率之一，这样使得所述小束照射所述颗粒内的至少两个空间位置。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述至少两个空间位置是部分重叠的。

9.如权利要求7所述的方法，所述方法进一步包括用至少两种荧光标记将所述颗粒染色，其中每种标记被配置成响应于通过具有所述光学频率之一的辐射照射而发射荧光辐射。

10.如权利要求9所述的方法，所述方法进一步包括收集从所述标记发出的荧光信号并将其数字化以生成时间荧光波形，每个时间荧光波形对应于所述标记之一。

11.如权利要求1所述的方法，其中所述处理步骤包括获得沿着与所述流式细胞术系统中的颗粒流动的方向基本上垂直的方向的所述颗粒的侧向尺寸的估计。

12.如权利要求11所述的方法，所述方法进一步包括获得沿着与所述流式细胞术系统中的颗粒流动的方向平行的方向的所述颗粒尺寸的估计。