[发明专利]CD151蛋白表达量的免疫组化检测方法及试剂盒在审

专利信息
申请号: 201711478705.4 申请日: 2017-12-29
公开(公告)号: CN108414757A 公开(公告)日: 2018-08-17
发明(设计)人: 黄华艺;谭春艳;周莹;梁莉;姜烈君 申请(专利权)人: 广西壮族自治区人民医院
主分类号: G01N33/574 分类号: G01N33/574;G01N33/68
代理公司: 广西南宁汇博专利代理有限公司 45114 代理人: 邹超贤
地址: 530021 广*** 国省代码: 广西;45
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摘要:
搜索关键词: 表达量 免疫组化检测 试剂盒 免疫组化试剂盒 生物医药技术 快速检测 快速诊断 预后判断 治疗效果 肿瘤组织 标志物 封闭液 高表达 潜在的 苏木精 血清 二抗 抗体 提示 肿瘤 参考 检测 研究
【说明书】:

发明涉及生物医药技术领域,具体是CD151蛋白表达量的免疫组化检测方法及试剂盒,CD151蛋白表达量的免疫组化试剂盒包括CD151抗体;5%BSA封闭液20mL;DAKO即用型HRP标记二抗10mL;3%H2O220mL;DAB;苏木精。本发明检测方法能够快速检测血清中CD151蛋白表达量,研究显示CD151蛋白在各种肿瘤组织中高表达。提示CD151蛋白作为一种潜在的肿瘤相关标志物,可为临床快速诊断、治疗效果判断和预后判断提供参考。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域,具体是一种CD151蛋白表达量的免疫组化检测方法及试剂盒。

背景技术

恶性肿瘤已经成为严重威胁人类健康的主要疾病。我国肿瘤发生人数不断升高,死亡率从70年代的83.65/10万上升到90年代的108.26/10万,上升了29.42%。广西的恶性肿瘤死亡率也呈上升趋势,仅1996年(34700人死亡)就比1991年增加12700人,增长近57.73%;广西的恶性肿瘤死亡标化减寿率为9.88‰;广西居民一生(按出生至74岁计算)死于恶性肿瘤的风险约为1/10左右(累积危险度10.66%);恶性肿瘤使广西人口平均期望寿命减少2.13岁。恶性肿瘤引发了沉重的社会经济负担,据估算每年用于癌症病人的医疗费用约800亿元,约占卫生总费用的20%。全国因癌症损失的失能调整生命年为185.1万人年,以此估算的经济损失高达1432.3亿元。肿瘤的早诊早治是目前预防治疗肿瘤的有效手段。

CD151是四跨膜蛋白超家族(transmembrane 4superfamily,TM4SF)中的一个成员,它能将整合素接收到的生物信号转导到细胞内的其他关键蛋白质(如激酶),参与细胞的黏附、迁移、形成半桥粒结构等多种病理生理过程,在肿瘤细胞的迁移、侵袭和转移中起重要作用,其过表达与多种癌症的预后不良有关。研究发现,CD151是癌蛋白,在乳腺癌、前列腺癌、胃癌、肝癌、肺癌、结直肠癌、膀胱癌、胆囊癌等肿瘤中高表达。动物实验发现小鼠模型中敲除CD151后肿瘤发生延迟,原发性肿瘤减少。因此,CD151是肿瘤诊断和预后判断的一个标志,也是靶向治疗的一个潜在重要靶点。开展CD151蛋白的表达水平检测,有利于开展临床快速诊断、治疗效果判断和预后判断的研究和应用。

目前,国内外报道的CD151检测方法都不很成熟,而且仅用于科研实验,尚未开发

成适用于临床检测的试剂盒,不利于临床常规使用。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术中的上述缺陷,提供一种CD151蛋白表达量的免疫组化检测方法及试剂盒。

为实现上述发明目的,本发明采用了如下技术方案:

一种CD151蛋白表达量的免疫组化试剂盒,包括CD151抗体;5%BSA封闭液20mL;DAKO即用型HRP标记二抗10mL;3%H2O2 20mL;DAB;苏木精。

此外,本发明还提供如下附属技术方案:

优选地,上述CD151蛋白表达量的免疫组化检测方法,包括如下步骤:

(1)制备免疫组化反应试剂和优化反应条件:CD151重组蛋白的制备与鉴定、制备单抗杂交瘤细胞-小鼠腹水模型、单抗杂交瘤-小鼠腹水CD151抗体的纯化;

(2)采用免疫组化技术对癌旁组织和肿瘤组织病理切片蛋白进行染色,检测染色浓度和染色范围;

(3)根据染色信号进行半定量评估,获得组织中CD151蛋白表达量。

优选地,上述步骤(2)中所述采用免疫组化技术对癌旁组织和肿瘤组织病理切片进行检测,具体方法为:

A、取癌旁组织和肿瘤组织进行石蜡包埋制备病理切片;

B、CD151抗体进行第一孵育;

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