[发明专利]一种关节假体感染诊断试剂盒

说明书

本发明公开了一种关节假体感染诊断试剂盒，包括引物、无镁离子PCR反应缓冲液、MgCl₂、Taq聚合酶、dNTP混合物及ddH₂O，所述引物包括通用引物、特异性引物及内参引物，所述特异性引物组成如下：ica D基因检测引物、eno基因检测引物、sar A基因检测引物、agr基因检测引物、Mec A基因检测引物及Mre B基因检测引物。本发明对于关节假体感染诊断尤其是早期诊断的灵敏度和特异度高，检测准确性高，在关节假体感染未出现临床症状的早起就能快速准确检测出感染的发生，能够及时采取治疗措施，防止病情的进一步恶化。

技术领域

本发明涉及关节假体感染诊断技术领域，特别涉及一种关节假体感染诊断试剂盒。

背景技术

关节假体术后感染（PJI，Prosthetic joint infections）是关节置换术后公认最严重的并发症之一，虽然PJI的发病率并不高，但自抗生素应用以来一直没有显著降低。据报道，髋和肩PJI的发病率约为1%，膝PJI的发病率约为2%，肘PJI的发病率约为9%；而对于关节翻修术，PJI的发病率甚至高达40%；另外，导致全踝关节置换手术失败的并发症中有33%是PJI。

当今，在面对PJI时，临床医生感到最困扰的问题就是早期诊断困难，当出现临床感染症状时多为晚期，常延误治疗并导致手术的失败和关节功能的丧失。PJI 的发病机制与假体表面生物膜的形成有关，关节假体术后生物膜形成很快，致病菌黏附于假体表面组成生物膜结构，导致PJI早期的临床标本中罕见常规培养阳性的浮游菌。所以，在PJI早期，临床上收集的关节液、血液及周围组织等标本中致病菌培养检测的敏感度极低；即使少量浮游菌从生物膜脱落进入临床标本，机体免疫机制的杀灭作用也会降低其培养检测的敏感度；另外，抗生素的使用会诱导致病菌的生长模式进入一种“活的非可培养状态”，这也进一步降低PJI早期标本培养检测的敏感度。不难想象，随着病例随访时间的延长，临床医生可能会困惑于“为什么PJI的发病率要比文献报道的数据高得多”，因此，迫切需要开展PJI早期诊断的研究工作。

对于PJI诊断当前临床上一直在应用的传统微生物培养技术，早在140 多年前就开始应用至今，且无根本性的改进，用其对PJI致病菌的流行病学分析并不准确。其原因包括：许多PJI的致病菌因为呈生物膜生长状态或需要特殊培养条件，常规培养检测的敏感度不高；低毒力致病菌（通常是皮肤的正常菌群，如凝固酶阴性葡萄球菌和丙酸杆菌）培养的阳性结果难以与标本污染相鉴别，常规培养检测的特异度不高；而抗生素的使用会使得致病菌进入一种“活的非可培养”生长状态，常规培养检测的敏感度不高。

PJI早期诊断技术的研究：至今，临床上依然没有准确可靠的PJI早期诊断技术，因为传统的标本培养技术敏感度极低，医生往往只能依靠个人的临床经验怀疑PJI发病的可能性。据国内学者报道，初次人工全膝关节置换术后PJI常规培养的敏感度只有65.5%。炎症标志物（白细胞计数、C 反应蛋白及红细胞沉降率）是临床实验室最常用的检测指标，但其对PJI早期诊断的特异度低。

近年来，许多研究者尝试寻找其他能够早期提示PJI的炎性标志物，如白细胞介素-6和降钙素原具有更高的特异度，但白细胞介素-6作为诊断指标的有效性尚需足够临床数据的支持，而降钙素原的敏感度也只有33%。术后早期出现疼痛症状仅提示PJI的可能性，其特异度不高；关节假体置换术后出现脓肿、窦道形成等临床症状时已是PJI的中晚期。因此，PJI早期高敏感度和特异度的诊断技术是当前亟待解决的难题。