[发明专利]一种高效薄层色谱-气相荧光衍生快速筛检叶酸的方法

说明书

本发明公开了一种高效薄层色谱‑气相荧光衍生快速筛检叶酸的方法，属于食品检测技术领域。根据叶酸本身不带荧光的特点，建立了一种原位气体氧化荧光衍生的方法，对待测样品进行衍生化反应，并利用HPTLC作为开放的色谱分离载体，再使用薄层色谱扫描仪进行扫描定量。本发明的方法检测周期短，准确性好，单次筛检过程从样品准备到获得最终结果仅需1‑2h，检测限可达到20～50μg/kg，检测方法可实现重复性RSD<10％，检测结果基本与HPLC检测结果一致。

技术领域

本发明涉及一种高效薄层色谱-气相荧光衍生快速筛检叶酸的方法，属于食品检测技术领域。

背景技术

叶酸(也称维生素B9)，分子结构由蝶啶对氨基苯甲酸和L－谷氨酸两部分组成，是一种具有重要生理功能的B族维生素，对人体健康和畜禽养殖具有重要的营养价值。目前，市场上的叶酸补充剂及功能性食品，种类繁多、质量参差不齐，叶酸含量标注不实等问题也多有存在。因此，研究一种快速定量叶酸的方法成为食品药品中对叶酸补充剂及相关食品药品监控急需解决的问题。

目前，食品药品中叶酸常用检测方法为高效液相色谱法，此方法样品的前处理复杂，需要将样品中大多数杂质去除，且检测时间较长，实验前需要进行长时间的系统平衡，测定过程只能逐一进行样品检测。

由于叶酸分子结构本身不具备荧光特性，因此，多采用紫外或者质谱对其色谱分离结构进行检测。但是前者灵敏度和特异性低，而后者对分析设备要求高，制样步骤复杂，分析成本昂贵。叶酸分子的氧化产物可以发射强烈的荧光，这一衍生过程可以在色谱展开后的薄层板上原位实施，极其有利于薄层光密度扫描定量。目前叶酸氧化方法多为在溶液中氧化，例如高锰酸钾、过氧化氢氧化法。溶液氧化法不利于在平面薄层色谱中应用，因此，急需建立一种适用于高效薄层色谱的氧化前处理方法以实现叶酸在薄层色谱上的高效快速检测。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种用于薄层色谱检测的原位气相氧化荧光衍生方法，所述方法是待测样品至于氧化环境中，氧化3～15min。

在本发明的一种实施方式中，所述氧化环境是含有氧化剂的密闭气体环境。

在本发明的一种实施方式中，所述氧化剂包括氧气、氯气、溴气的至少一种。

在本发明的一种实施方式中，所述氧化剂的用量为10-40cm³/m³。

本发明的第二个目的是提供一种筛检叶酸的方法，所述方法是将待测样品经过所述原位气相氧化荧光衍生方法进行氧化荧光衍生处理，再经过薄层色谱扫描定量。

在本发明的一种实施方式中，所述方法是将待测样品先在薄层色谱上展开，再进行氧化荧光衍生，最后薄层色谱扫描定量。

在本发明的一种实施方式中，所述待测样品包括复合维生素药片、早餐谷物或动物饲料。

在本发明的一种实施方式中，所述维生素药片磨粉后用0.1～5％的氨水溶解，超声10～20min取出，离心，膜过滤后进行氧化荧光衍生。

在本发明的一种实施方式中，将所述谷物或饲料磨粉后，按1:4的质量比加入至0.05～0.2mol/L的盐酸，放入高压灭菌锅中121℃加热15min调pH至6.8-7.2，加入淀粉酶置于37-55℃中反应4h。反应结束后，用甲醇定容至25或50mL，离心后取上清液过膜得到谷物/饲料样品。

在本发明的一种实施方式中，所述薄层色谱的分离为：将2-8μL样品点样，点样后用体积比为6：4：1：1的甲醇/乙酸乙酯/三乙胺/水展开，上行展开开至硅胶板的3/5处，取出后硅胶板置于50℃平板加热器上充分干燥3min。

在本发明的一种实施方式，经氧化荧光衍生后的样品置于366nm紫外灯下照射，具有清晰条带的样品中含有叶酸。