[发明专利]TAFIa含量的检测方法、用于检测TAFIa含量的试剂盒及二者的应用

说明书

本发明提供了一种TAFIa含量的检测方法、用于检测TAFIa含量的试剂盒及二者的应用，涉及生物化学检测技术领域，本发明提供的TAFIa含量的检测方法，通过测量TAFIa酶促反应的产物的含量，间接得到TAFIa的含量，具有灵敏度高、反应速度快、条件温和、无毒无害、成本低廉等优点。本发明提供的用于检测TAFIa含量的试剂盒，包括TAFIa标准品、底物、氨基酸氧化酶及(a)过氧化物酶、香草酸和4‑氨基安替比林或(b)化学发光剂。利用该试剂盒检测TAFIa的含量，具有灵敏度高、特异性强、反应速度快的优点，并且操作方法简单，不需要复杂的专业技术。

技术领域

本发明涉及生物化学检测技术领域，尤其是涉及一种TAFIa含量的检测方法、用于检测TAFIa含量的试剂盒及二者的应用。

背景技术

凝血酶激活的纤溶抑制物(thrombin-activatable fibrinolysis inhibitor，TAFI)又称为羧肽酶原U(procarboxylpeptidase U)，是由肝脏合成的一种糖蛋白。TAFI以酶原的形式存在于血浆中，可被凝血酶、纤溶酶、凝血酶-血栓调节蛋白复合物等激活，将TAFI切割为两部分：含92个氨基酸的TAFI激活肽(TAFI activation peptide)和393个氨基酸的TAFIa，这一过程称为TAFI的激活。TAFIa具有生理活性，可以水解纤维蛋白C末端的赖氨酸，使纤溶酶原不能被激活，从而发挥了纤溶抑制的作用。

TAFI在纤溶过程中发挥了重要的调控作用，因此TAFI浓度与某些心脑血管疾病有相关性。如冠状动脉疾病、静脉血栓、心绞痛、局部缺血性中风等均和TAFI水平呈正相关。由于TAFI被激活为TAFIa之后才发挥其纤溶调控作用，检测血液中的TAFIa含量可以直观地反映纤溶过程。

TAFIa的检测有诸多难点：(1)TAFIa会由于蛋白构象的改变而转变为无活性的TAFIai，这一过程使得TAFIa在37℃下的半衰期只有8-15分钟；(2)TAFIa占TAFI的比例只有约0.01％，含量低；(3)血液中的羧肽酶N(CPN)和TAFIa具有类似的催化活性。因此体外检测TAFIa的方法必须要保证待测物的活性，而且要有较高的灵敏度和特异性。虽然可以用ELISA等免疫学方法检测TAFI的含量，但这种方法不能区分有活性的TAFIa和无活性的TAFIai。

因此，开发一种能够有效区分有活性的TAFIa和无活性的TAFIai而进行检测的，灵敏度高、特异性强、操作简单、成本低廉的TAFIa含量的检测方法尤为重要。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种TAFIa含量的检测方法，本发明的第二个目的在于提供一种用于检测TAFIa含量的试剂盒，本发明的第三个目的在于提供上述种TAFIa含量的检测方法或用于检测TAFIa含量的试剂盒在TAFIa含量的体外检测中的应用，以缓解现有技术中存在的对TAFIa含量检测灵敏度低、反应速度慢、操作复杂、成本高昂的技术问题。

本发明提供了一种TAFIa含量的检测方法，所述检测方法包括：

通过测量TAFIa酶促反应的产物的含量，间接得到TAFIa的含量；

所述酶促反应的产物为过氧化氢。

进一步地，所述检测方法还包括：

将含有TAFIa的样本与底物混合进行反应，生成游离的氨基酸，将所述游离的氨基酸进行氧化处理，得到所述酶促反应的产物，通过检测所述酶促反应的产物的含量，间接得到TAFIa的含量。

进一步地，所述底物为苯甲酰苯丙氨酰精氨酸、苯甲酰酪氨酰精氨酸、苯甲酰色氨酰精氨酸、苯甲酰苯丙氨酰赖氨酸、苯甲酰酪氨酰赖氨酸或苯甲酰色氨酰精氨酸中的一种。

进一步地，所述游离的氨基酸为游离的精氨酸或赖氨酸。