[发明专利]一种牛羊肉中己烯雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇雌激素残留量的测定方法

说明书

技术领域

本发明属于肉类品质检测技术领域，具体地，涉及一种牛羊肉中四种雌激素残留量的测定方法。

背景技术

当前，我国食品安全问题因三鹿奶粉中“三聚氰胺”事件而受到极大关注。除食品加工中恶意添加外，食品中污染的化学物质更多的来自于喂养畜禽所使用的动物饲料、治病所用兽药残留及催熟植物所用的生长调节剂等。

激素类药物在牛羊产业中的应用可表现在提高牛羊的繁殖性能，免疫去势，高饲料报酬、促进生长，改善牛羊肉品质，促进泌乳牛羊的产奶量等。我们所食用的牛羊肉也不可避免的会有雌激素残留，而这些激素就会通过食物链在人体内积累，可诱发癌变，对生殖与神经等系统带来影响，还造成严重的环境问题。还能增加妇女得子宫癌的可能，使生殖道产生炎症，使女性提前发育，使男性生殖器官发生异常与病变，及女性乳腺癌和子宫内膜异位发生率上升，因此，对牛羊肉的监测也是保证安全的措施之一。但是目前国家标准中只有己烯雌酚的检测方法，而其余雌激素的没有明确的测定方法。

发明内容

本发明的目的是为了解决上述问题，提供一种牛羊肉中己烯雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇雌激素残留量的测定方法。

本发明的目的通过以下技术方案来具体实现：

一种牛羊肉中己烯雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇雌激素残留量的测定方法，包括如下步骤：

1）配制流动相、设置色谱条件

流动相：甲醇：磷酸氢二钠溶液体积比80:20；

色谱条件：检测波长210-400nm，流速为1.0ml/min，柱温：40℃，进样量为10μl；

2）标准品贮备液的配制、供试样品处理

①称取己烯雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇的标准品各50mg，分别定容至50ml，制成1.0mg/ml标准品贮备液，备用；

②称取供试牛羊肉样品，用甲醇进行两次超声萃取-离心操作，取两次离心后的上清液蒸干后加甲醇，过滤，制成供试品处理液，准备上机；

3）混合标样的配制

分别吸取2.5ml步骤2）得到的己烯雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇标准贮备液并混合，再将混合液用甲醇分别稀释至雌激素浓度为0.4mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml，制成混合标样，备用；

4）线性回归分析

将步骤2）得到的雌二醇、己烯雌酚、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇的单个标准品贮备液过滤，以步骤1）的条件依次注入HPLC中，根据标准品的出峰时间进行定性，然后将步骤3）得到的0.4mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml的混合标样过滤，以步骤1）的条件依次注入HPLC中，以4种混标的峰面积比与其质量浓度进行线性回归分析，得4种混标的线性回归方程；

5）供试样品中雌激素含量的测定

将步骤2）得到的供试品处理液以步骤1）的条件注入HPLC中，以峰面积、按步骤4）得到的线性回归方程计算供试品处理液中己烯雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇的含量，然后计算供试牛羊肉样品中己烯雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇的残留量。

进一步的，所述步骤1）中，所述磷酸氢二钠溶液的浓度为0.043mol/l；

色谱柱类型为：C18，ODS5μm，150×4mm；

所述检测波长优选为280nm。

进一步的，所述步骤2）中，所述供试品处理液的具体制备方法为：

称取供试牛羊肉粉碎样品5.0g，放入20ml带盖离心管中，加甲醇10.0ml，超声萃取20min，以10000转/min离心10min，移出上清液，残渣中再加10.0ml甲醇，再超声萃取20min ，以10000转/min离心10 min，合并上清液，于80℃水浴蒸干，用24ml甲醇溶解残渣，经0.22μm一次性有机滤膜过滤，得供试品处理液。

进一步的，所述步骤4）中，过滤时使用的滤膜为0.45μm有机膜。

进一步的，所述步骤5）中，供试牛羊肉样品中己烯雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇的残留量计算方法如下：

X=V₁C/mV₂；

式中：

X：样品中某一种雌激素的含量 mg/kg；

C：根据线性回归方程得到的某一种雌激素的含量 ng；

V₁：样品的最终溶解体积 ml；

V₂：进样体积 μl；

m：样品质量 g。