[发明专利]一种牛羊肉中己烯雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇雌激素残留量的测定方法

权利要求书

1.一种牛羊肉中己烯雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇雌激素残留量的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）配制流动相、设置色谱条件

流动相：甲醇：磷酸氢二钠溶液体积比80:20；

色谱条件：检测波长210-400nm，流速为1.0ml/min，柱温：40℃，进样量为10μl；

2）标准品贮备液的配制、供试样品处理

①称取己烯雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇的标准品各50mg，分别定容至50ml，制成1.0mg/ml标准品贮备液，备用；

②称取供试牛羊肉样品，用甲醇进行两次超声萃取-离心操作，取两次离心后的上清液蒸干后加甲醇，过滤，制成供试品处理液，准备上机；

3）混合标样的配制

分别吸取2.5ml步骤2）得到的己烯雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇标准贮备液并混合，再将混合液用甲醇分别稀释至雌激素浓度为0.4mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml，制成混合标样，备用；

4）线性回归分析

将步骤2）得到的雌二醇、己烯雌酚、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇的单个标准品贮备液过滤，以步骤1）的条件依次注入HPLC中，根据标准品的出峰时间进行定性，然后将步骤3）得到的0.4mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml的混合标样过滤，以步骤1）的条件依次注入HPLC中，以4种混标的峰面积比与其质量浓度进行线性回归分析，得4种混标的线性回归方程；

5）供试样品中雌激素含量的测定

将步骤2）得到的供试品处理液以步骤1）的条件注入HPLC中，以峰面积、按步骤4）得到的线性回归方程计算供试品处理液中己烯雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇的含量，然后计算供试牛羊肉样品中己烯雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇的残留量。

2.根据权利要求1所述的牛羊肉中己烯雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇雌激素残留量的测定方法，其特征在于，所述步骤1）中，所述磷酸氢二钠溶液的浓度为0.043mol/l；

色谱柱类型为：C18，ODS5μm，150×4mm；

所述检测波长优选为280nm。

3.根据权利要求1所述的牛羊肉中己烯雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇雌激素残留量的测定方法，其特征在于，所述步骤2）中，所述供试品处理液的具体制备方法为：

称取供试牛羊肉粉碎样品5.0g，放入20ml带盖离心管中，加甲醇10.0ml，超声萃取20min，以10000转/min离心10min，移出上清液，残渣中再加10.0ml甲醇，再超声萃取20min ，以10000转/min离心10 min，合并上清液，于80℃水浴蒸干，用24ml甲醇溶解残渣，经0.22μm一次性有机滤膜过滤，得供试品处理液。

4.根据权利要求1所述的牛羊肉中己烯雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇雌激素残留量的测定方法，其特征在于，所述步骤4）中，过滤时使用的滤膜为0.45μm有机膜。

5.根据权利要求1所述的牛羊肉中己烯雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇雌激素残留量的测定方法，其特征在于，所述步骤5）中，供试牛羊肉样品中己烯雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇的残留量计算方法如下：

X=V₁C/mV₂；

式中：

X：样品中某一种雌激素的含量 mg/kg；

C：根据线性回归方程得到的某一种雌激素的含量 ng；

V₁：样品的最终溶解体积 ml；

V₂：进样体积 μl；

m：样品质量 g。