[发明专利]一种基于OMP18检测空肠弯曲菌的ELISA检测试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明属生物医药和医学检验技术领域，涉及免疫化学检测技术，具体涉及一种空肠弯曲菌免疫学检测试剂盒，更具体涉及一种基于OMP18的B细胞抗原表位的空肠弯曲菌的ELISA检测试剂盒及其制备方法

背景技术

空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)是常见的人兽共患病病原菌，广泛存在于鸟、禽、狗、猫等动物体内，也是一种食物源性病原菌，可通过污染禽畜肉和代谢产品及未经消毒处理的水而导致感染，如未煮熟的鸡肉、巴氏杀菌不彻底的牛奶、蛋制品、生火腿等。另外，空肠弯曲菌在牛、羊、狗等畜禽的生殖道和肠道内大量存在，故可通过分娩或排泄物污染食物和饮水。

空肠弯曲菌能引起人类多种疾病，例如，急性肠炎、格林-巴利综合症，被认为是人类细菌性腹泻的主要致病菌之一，是全球范围内重要的人兽共患细菌性肠道病原菌，其感染率在世界各地普遍呈上升趋势。空肠弯曲菌致病性强，人群普遍易感，5岁以下儿童的发病率最高，苍蝇亦起重要的媒介作用，亦可经接触感染，同时感染的产妇可在分娩时传染给胎儿。

在食品加工、贮存和运输过程中的冷、热、日照和氧气等均可对空肠弯曲菌造成损害，但食品中的空肠弯曲菌往往数量少且活性较低，常规方法不易检测得到。另外，空肠弯曲菌体外培养困难，生长条件要求苛刻，常规培养方法对于快速准确的检测与鉴定有一定的难度。体外培养难度大和待检测物数量少给快速正确检测带来挑战。近年来，核酸分子杂交技术和PCR等分子生物学检测方法取得了很大进展，国内外已先后开展了一些针对空肠弯曲菌的基因检测，针对的靶基因主要包括16S rDNA、3S rDNA、hipO、鞭毛蛋白基因(flaA或flaB)等，基于PCR扩增技术的检测方法为核酸水平检测空肠弯曲菌提供了有效的检测手段，但由于采用PCR方法需要对病原菌的数量有要求，提取致病菌的DNA片段，对操作者有一定专业背景的要求，同时从准备到得到检测结果时间较长，不能满足快速准确的检测要求。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供了一种基于OMP18的B细胞抗原表位多肽检测空肠弯曲菌的酶联免疫试剂盒，使所述试剂盒满足对空肠弯曲菌进行快速检测报告的需求。

本发明提供了一种基于OMP18的B细胞抗原表位多肽检测空肠弯曲菌的酶联免疫试剂盒，包括以下组分：

(1)包被有OMP18的B细胞抗原表位多肽的检测板；

(2)洗涤液；

(3)二抗酶标记的兔抗IgG溶液；

(4)终止液；

(5)样品稀释液；

(6)底物显色液。

优选的，所述的检测板为真空密封包装。

优选的，所述终止液为1～2mol/L的硫酸溶液或2～3mol/L的氢氧化钠溶液。

优选的，所述样品稀释液为pH值7.4～8.0、摩尔浓度0.1～0.25mol/L、含有45～50％甲醇的磷酸盐缓冲液。

优选的，所述OMP18的B细胞抗原表位多肽抗原的包被浓度为4～9μg/ml。

优选的，所述酶标记兔抗IgG所使用的酶为HRP，所述底物显色液为TMB。

优选的，所述洗涤液为包含0.05～0.1％Tween 20的PBS溶液。

优选的，所述空肠弯曲菌OMP18的B细胞抗原表位多肽的A抗原表位氨基酸序列为STKSTSVSGDSSVDSNRGSGGSDGWDID。

所述空肠弯曲菌OMP18的B细胞抗原表位多肽的B抗原表位肽序列为EGNCDEWGTDEY。

优选的，所述空肠弯曲菌OMP18的B细胞抗原表位多肽的C抗原表位肽序列为SYGETNPVCTEKTKACDAQNRR。

本发明提供了上述技术方案所述的试剂盒在检测空肠弯曲菌中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

a、将待测样品进行前处理；

b、将所述步骤a处理后的待测样品加入已经包被有OMP18的B细胞抗原表位多肽的检测板孔内，混合，孵育，用洗涤液洗涤；

c、所述检测板孔加入二抗溶液，混合，孵育，用洗涤液洗涤；

d、加入底物显色液，孵育，加入终止液混匀，测定OD值。