[发明专利]一种快速筛选植物中痕量紫杉醇类活性物质的方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然产物提取技术领域，具体涉及一种快速筛选植物中痕量紫杉醇类活性物质的方法。

背景技术

紫杉醇是从红豆杉属植物中分离出来的一种具有抗癌作用的二萜类化合物，因其独特的抗癌机理及其显著疗效而受重视；紫杉醇同类物质由于具有一定的药用作用并含有紫杉醇的基本骨架能够通过有效方法转化成紫杉醇，而越来越受到关注。

目前，分离检测植物中紫杉醇类物质常用方法的具体过程为：采用乙醇进行萃取，经水和二氯甲烷溶剂震荡分层，之后蒸干二氯甲烷层，加入正己烷和甲醇震荡，甲醇层浓缩后进入检测器检测；或萃取后经固相柱净化，用大量溶剂洗脱，浓缩后进入高效液相分离检测器检测。这些方法不能在短时间内分离难以实现高通量筛选痕量紫杉醇类活性物质。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于一种快速、高效筛选植物中紫杉醇类活性物质的方法，使所述方法能够实现短时间内同时分析极性差异较大的各种紫杉醇类活性物质。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种快速筛选植物中痕量紫杉醇类活性物质的方法，包括如下步骤：

(1)将植物样品经有机溶剂超声萃取，得到植物萃取液；

(2)将所述步骤(1)得到的植物萃取液先后经过未活化的碳纤维材料和活性炭纤维，得到吸附有植物紫杉醇类活性物质的未活化的碳纤维材料和活性炭纤维材料；

(3)采用第一流动相洗脱所述步骤(2)得到吸附有植物紫杉醇类活性物质的未活化的碳纤维材料和活性炭纤维材料，得到第一组分洗脱液，将所述第一组分洗脱液在线进行离子化，筛选得到第一紫杉醇前体物，所述第一紫杉醇前体物包括巴卡亭III和10-脱乙酰基巴卡亭III；

所述第一流动相包括体积终浓度为0.05～0.2％的甲酸溶液与体积终浓度为8～12％的甲醇溶液；

(4)采用第二流动相洗脱所述步骤(3)得到活性炭纤维材料，得到第二组分洗脱液，对所述第二组分洗脱液进行离子化，得到第二紫杉醇前体物，所述第二紫杉醇前体物包括紫杉醇、7-木糖基-10脱乙酰基紫杉醇、7-木糖基-紫杉醇、三尖杉宁碱和7-表-10-脱乙酰基紫杉醇；

所述第二流动相包括体积终浓度为0.05～0.2％的甲酸溶液与体积浓度为55～70％的甲醇终溶液。

优选的，所述步骤(1)中有机溶剂为甲醇；

所述甲醇的体积浓度为99.9％。

优选的，所述步骤(1)中超声萃取的温度为18～25℃，所述超声萃取的时间15min/次，萃取3次，每次间隔时间为5～10min。

优选的，所述步骤(1)中超声萃取后还包括：将所述萃取得到的物料经过滤膜过滤；

所述滤膜的孔径为0.22μm、0.45μm或0.6μm。

优选的，所述滤膜的孔径为0.45μm。

优选的，所述步骤(3)中第一流动相的流速为1.5～3.5mL/h；

所述步骤(4)中第二流动相的流速为1.5～3.5mL/h。

优选的，所述步骤(3)中第一流动相的流速为2.5mL/h；

所述步骤(4)中第二流动相的流速为2.5mL/h。

优选的，所述步骤(3)中第一流动相的流速为2.5mL/h。

优选的，所述第一流动相包括体积终浓度为0.01％的甲酸溶液与体积终浓度为10％的甲醇溶液。

优选的，第二流动相包括体积终浓度为0.01％的甲酸溶液与体积浓度为60％的甲醇终溶液。

本发明提供了一种快速筛选植物中痕量紫杉醇类活性物质的方法，以未活化的碳纤维材料和活性炭纤维材料依次对紫杉醇类活性物质进行吸附，未活化的碳纤维材料通过π-π作用力、范德华力和疏水相互作用力等非共价作用力与色素、脂类等干扰物结合，去除杂质；活性炭纤维材料，表面粗糙，具有许多含氧的官能团，增强了碳纤维的亲水性，活性炭纤维材料可以与极性较强的紫杉醇类物质结合，同时极性最强的紫杉醇前体物与两种炭纤维的作用力均很弱，被第一流动相快速洗脱，经过电喷雾离子源离子化，进入三重四级杆质谱分析检测。组分分离与串联质谱离子化过程结合从各种植物中筛选多种紫杉醇类物质，能有效提高目标物离子化效率，并减少同时分析的物质降低背景干扰，提高检测灵敏度，整个筛选时间只需5min，且筛选的检出限达到25ng/g的水平；且本发明提供的筛选方法快速，操作简便，对于不同种类植物样品通用性好，消耗原料和有机溶剂量少且更经济环保。

附图说明