[发明专利]一种联合检测多种性病病原体DNA的方法

说明书

本发明公开了一种联合检测多种性病病原体DNA的方法，以提取的待测性病病原体样本的基因组DNA作为模板，GP和GPSP引物作为扩增引物，特异性探针作为探针、IAC质粒作为内控对照，进行多重PCR反应，得到PCR产物；实时监测荧光值的变化，计算荧光值与温度的负导数，获得特异性探针与PCR产物的熔解曲线，得出熔点Tm值，通过特异性探针标记的荧光通道及Tm值确定相应的感染的性病病原体。本发明的检测方法可以同时定性检测沙眼衣原体、淋球菌、生殖支原体、阴道毛滴虫、HSVI、HSVII、解脲脲原体、微小脲原体、人型支原体共9种常见性病病原体DNA，检测性病病原体多，方法简单。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，更具体地，本发明涉及一种联合检测多种性病病原体DNA的方法。

背景技术

性传播感染是引起全球急性疾病、不孕、长期残疾和死亡的一个主要因素，给成千上万的成人和婴儿造成严重的医疗与心理后果。至今已经有超过30种细菌、病毒和寄生虫等病原体被证实可以通过性接触途径传播。

世界卫生组织(WHO)统计2008年全球和区域15-49岁成年人中4种可治愈性病(沙眼衣原体感染、淋病、梅毒和阴道毛滴虫病)发病与患病估计数。2008年全球15-49岁成年人的4种性病新发病例总数约为4.989亿，其中沙眼衣原体感染1.057亿，淋病1.061亿，阴道毛滴虫病2.764亿。此外，在2008年的任一时点上估计有1.004亿成年人患沙眼衣原体感染，3640万患淋病，1.87亿患阴道毛滴虫病。中国疾病预防控制中心性病控制中19家哨点门诊2012年10至2013年2月共报告5种性病2580例，为生殖道沙眼衣原体感染418例，占16.23％；淋病407例，占15.81％；生殖器疱疹140例，占5.44％。

因此，开发对多种性病病原体的联合检测方法对性病的诊断非常重要。

发明内容

有鉴于此，为了克服上述现有技术中存在的问题，本发明提供了一种联合检测多种性病病原体DNA的方法。

为了实现上述发明目的，本发明采取了以下技术方案：

一种联合检测多种性病病原体DNA的方法，包括以下步骤：

(1)、使用商品化的细菌DNA提取试剂盒(如天根细菌基因组小量DNA制备试剂盒)提取生殖泌尿道分泌物棉拭子样本的基因组DNA，取1.0mL或以上体积无菌生理盐水漂洗棉拭子样本，转移至1.5mL离心管中，12000rpm/min离心10min，小心去除干净上清液避免扰动或触动到沉淀，可多次收集沉淀；沉淀按天根细菌基因组小量DNA制备试剂盒提取，提取方法按说明书第二步开始操作，最后用50μL洗脱液洗脱；

(2)、以提取的待测性病病原体样本的基因组DNA作为模板，通用引物GP1、GP2和GPSP引物作为扩增引物，特异性探针作为探针，IAC质粒作为内控对照，进行多重PCR反应，得到PCR产物；

所述待测性病病原体为沙眼衣原体、淋球菌、生殖支原体、阴道毛滴虫、HSVI、HSVII、解脲脲原体、微小脲原体、和人型支原体；

所述通用引物GP1具有如SEQ ID NO:1所示的碱基序列，所述通用引物GP2具有如SEQ ID NO:2所示的碱基序列；