[发明专利]一种扩增水稻香味基因Badh2序列的方法

说明书

技术领域

本发明属于分子遗传学技术领域，具体的说是涉及一种扩增水稻香味基因Badh2序列的方法。

背景技术

香稻是一种具有独特香味的功能稻和特种稻，由于食味佳且具有显著药效，香稻米在我国古代就享有“贡米”之称，其国际市场价格远远高于非香米，是非香米优质米的2-3倍。随着市场需求量的增加，明确水稻香味产生的原因是发掘香味基因资源和发挥香稻优势的有效策略，更是育种家开展优质特色水稻品种培育的首选途径。早在90年代初，分子标记方法的应用将水稻的香味基因定位在第8染色体上，但直到2008年，才有相关研究发现水稻的香味主要受第8染色体上的Badh2基因控制，并开发了扩增香味基因Badh2整个基因序列的引物(该引物也是目前唯一已报道的可扩增Badh2基因的引物，见表1)。

利用这一研究结果，对扩增出的Badh2基因进行测序分析，目前已发现导致香稻香味产生的原因主要有四种：Badh2基因第2个外显子的7bp缺失、第7个外显子的8bp缺失、第4-5外显子803bp的缺失、第13外显子中插入3bp，并开发了相应分子标记。但由于气候条件和地理位置的不同，我国水稻还存在很多特殊的香稻地方品种，在营养成分及微量元素的含量方面都优于其他品种，利用已开发的4种香味基因型分子标记无法检测出其香味类型，且在加大对香稻品种研究的同时，发现利用已报道的引物根本无法扩增出这些品种的Badh2整个基因序列，阻碍了香稻新香源的挖掘，极大地影响了香稻资源的育种利用。

表1已发表的扩增整个水稻香味基因Badh2序列的引物

针对上述技术的不足，本发明为香味基因Badh2重新设计了一组引物，并通过对PCR扩增体系和扩增程序的重新摸索，最终形成了扩增香稻Badh2整个基因序列的一种新方法。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种扩增水稻香味基因Badh2序列的方法。

本发明提供的技术方案为：

一种扩增水稻香味基因Badh2序列的方法，包括以下步骤：

(1)由如序列表SEQIDNo.1-26所示序列的特异性引物组；

(2)经过碱基的取代、缺失或添加；

(3)在PCR扩增体系中经过聚合酶链式反应得到水稻香味基因Badh2序列。

作为优选，所述的PCR扩增体系由KAPA2GRobustMix、Forwardprimer(10Μm)、Reverseprimer(10Μm)、TemplateDNA和ddH₂O组成。

作为优选，所述的PCR扩增体系共计25μL，其中KAPA2GRobustMix12.5μL、Forwardprimer(10Μm)1μL、Reverseprimer(10Μm)1μL、TemplateDNA1μL和ddH₂O9.5μL。

作为优选，所述的聚合酶链式反应的程序为94℃5min；94℃30sec，60℃30sec，72℃1min，循环35个；72℃5min；12℃forever。

本发明还提供了使用所述的扩增水稻香味基因Badh2序列的方法扩增谷对实香糯的Badh2基因，其具有如序列表SEQIDNo.27所示的核苷酸序列。

本发明还提供了所述的扩增水稻香味基因Badh2序列的方法在鉴定水稻香稻品种与水稻非香稻品种中的用途。

本发明还提供了所述的扩增水稻香味基因Badh2序列的方法在定向培育水稻香稻品种基因型鉴定中的用途。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

(1)本发明的方法具有简单、快速、技术要求较低、结果鉴定准确的特点。