[发明专利]一种从山胡椒根中提取生物碱的制备方法及其用途

权利要求书

1.一种从山胡椒根中提取生物碱的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）原料处理：取山胡椒根阴干至含水量为3-8%后，粉碎，过20-80目筛，得粗粉，备用；

2）酸性醇水溶液渗漉提取：取步骤1）制得的粗粉，装入渗漉筒中，加1-2倍量的pH值1-2的酸性醇水溶液，其中醇的浓度为30％-80％，浸润3-6小时后装入渗漉桶中，用10-18倍量上述酸性醇水溶液进行渗漉提取，调节流速，以10-20mL/min流速收集渗漉提取液至山胡椒根粗粉中的生物碱浸提干净为止；采用薄层层析法，在紫外灯254nm下显棕黑色斑点，碘化铋钾溶液显橘黄色,所得提取液中加入碱水调节pH值至9-10，然后加入有机溶剂萃取2-6次，制得萃取液；所述提取液与有机溶剂的体积比为1:1-3；其中色谱条件为：GF254薄层层析色谱，以氯仿：甲醇=6:1为展开剂，在254nm紫外光灯下显色观察；所述酸性醇水溶液为浓度为0.5-2%的醋酸、盐酸、硫酸或酒石酸中的任一种；碱水为饱和的碳酸钠溶液或15-25%的氨水；

3）将步骤2）制得的萃取液，于水浴温度40-55℃，真空度为0.09-0.1Mpa的条件下进行减压浓缩，浓缩至浓缩液的浓度为0.5-1.0g/ml，制得山胡椒根总生物碱提取物浓缩液；

4）将步骤3）制得的山胡椒根总生物碱提取物浓缩液过硅胶柱色谱，用氯仿-甲醇的体积比依次为10:1、8:1、6:1、4:1、2:1、0:1进行梯度洗脱，收集洗脱液，洗脱液经薄层色谱检测，合并相同组分，得A-E共5个组分；进行抗肿瘤活性追踪，B、C组分抗肿瘤活性较好；

5）对B组分，经反相柱色谱，用20-100%的甲醇-水梯度洗脱，洗脱液经薄层色谱检测，合并相同组分，回收洗脱液得B1-B4共4个组分；

6）将步骤5）制得的B2组分过硅胶柱，用氯仿-甲醇进行纯化，得棕黄色固体化合物1和化合物2；氯仿-甲醇的体积比为8:1；

7）将步骤4）制得的C组分，经反相柱色谱，用30-100%的甲醇-水梯度洗脱，洗脱液经薄层色谱检测，合并相同组分，回收溶剂得C1-C8共8个组分；

8）将步骤7）制得的C4组分过凝胶柱，用30-100%的甲醇-水纯化，得棕黄色固体化合物3；

所述化合物1为N-甲基樟苍碱，其结构式为：

所述化合物2为樟苍碱，其结构式为：

所述化合物3为（+）-Boldine，其结构式为：

。

2.根据权利要求1所述的一种从山胡椒根中提取生物碱的制备方法，其特征在于步骤2）中有机溶剂为乙酸乙酯、乙醚、丙酮、正丁醇、氯仿或二氯甲烷中的一种或几种混合；

3.根据权利要求1所述的一种从山胡椒根中提取生物碱的制备方法，其特征在于步骤5）中依次用20%的甲醇-水、40%的甲醇-水、60%的甲醇-水、80%的甲醇-水、100%的甲醇依次梯度洗脱。

4.根据权利要求1所述的一种从山胡椒根中提取生物碱的制备方法，其特征在于步骤7）中先用30%的甲醇-水洗脱，然后依次用50%的甲醇-水、70%的甲醇-水洗脱，最后用100%甲醇洗脱；步骤8）中先用30%的甲醇-水纯化，然后用50%的甲醇-水、70%的甲醇-水纯化，最后用100%甲醇-水纯化。