[发明专利]苏氨酸脱氨酶、编码基因、载体、工程菌及应用在审
| 申请号: | 201510751632.6 | 申请日: | 2015-11-06 |
| 公开(公告)号: | CN105349516A | 公开(公告)日: | 2016-02-24 |
| 发明(设计)人: | 郑裕国;徐建妙;柳志强;胡海峰;傅芳田 | 申请(专利权)人: | 浙江工业大学 |
| 主分类号: | C12N9/88 | 分类号: | C12N9/88;C12N15/60;C12N15/70;C12N1/21;C12P7/40 |
| 代理公司: | 杭州天正专利事务所有限公司 33201 | 代理人: | 黄美娟;李世玉 |
| 地址: | 310014 浙*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 苏氨酸 脱氨酶 编码 基因 载体 工程 应用 | ||
1.一种苏氨酸脱水酶,其特征在于所述酶的氨基酸序列为SEQIDNO:1所示。
2.一种权利要求1所述苏氨酸脱水酶的编码基因,其特征在于所述编码基因的核苷酸序列为SEQIDNO:2所示。
3.一种由权利要求2所述苏氨酸脱水酶编码基因构建的重组载体。
4.一种由权利要求3所述重组载体转化获得的重组基因工程菌。
5.一种权利要求2所述苏氨酸脱水酶编码基因在制备苏氨酸脱水酶中的应用,其特征在于所述的应用为:构建含有所述苏氨酸脱氨酶基因的重组载体,将所述重组载体转化至大肠杆菌中,诱导培养,从培养液中分离得到含有重组苏氨酸脱氨酶的菌体细胞。
6.一种权利要求1所述苏氨酸脱水酶在催化L-苏氨酸制备α-丁酮酸中的应用。
7.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述的应用以含苏氨酸脱水酶基因的工程菌经发酵培养获得的湿菌体为催化剂,以L-苏氨酸为底物,以pH值4.0-10.0的缓冲液为反应介质,在15~50℃、150-200rpm条件下进行催化反应,反应完全后,将反应液分离纯化得到α-丁酮酸。
8.如权利要求7所述的应用,其特征在于所述湿菌体的用量以缓冲液体积计为5~50g/L,所述底物用量以缓冲液体积计为100~600g/L。
9.如权利要求7所述的应用,其特征在于所述缓冲液为pH值7.0的磷酸钠缓冲液。
10.如权利要求7所述的应用,其特征在于所述反应液分离纯化的方法为:反应结束后,将反应液离心,上清液减压蒸馏至1/2体积,80℃保温40min,离心,上清液旋转蒸发除去水,取浓缩物得到α-丁酮酸。
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