[发明专利]一种组合物、制剂及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及细胞领域，特别涉及一种组合物、制剂及其用途。

背景技术

从生物学上讲，衰老是生物随着时间的推移，自发的必然过程，它是复杂的自然现象，表现为结构的退行性变和机能的衰退，适应性和抵抗力减退。在生理学上，把衰老看作是从受精卵开始一直进行到老年的个体发育史。从病理学上，衰老是应激和劳损，损伤和感染，免疫反应衰退，营养失调，代谢障碍以及疏忽和滥用药物积累的结果。

美容和抗衰老越来越成为人们对美丽追求的手段，相应的也出现了越来越多的美容抗衰老产品，在这些产品中，以外用的护肤产品为主，起到延缓衰老和皮肤保持弹性的目的，但这些产品无法满足有面孔缺损等方面问题的人群对美容抗衰老的需求。而本专利的产品能很好的解决这些面孔缺损问题，起到面部缺损修复和面部年轻化的目的。

目前常采用高浓度血浆浓缩(PRP)进行面部缺损修复，是利用自身血液制作的富含血小板的高浓度血浆。但是PRP制剂无细胞成分，主要是血小板，通过血小板分泌各类生长因子促进周围组织细胞的增殖来达到组织修复的功能，缺损修复能力低，时间长。血小板缺陷、纤维蛋白合成障碍、血流动力不稳定等人群不能使用。PRP制剂需要从自体抽取外周血进行血小板浓缩，属于血液制品，不适用于不具备医疗资质的机构单位。

因此，提供一种快速高效修改面孔缺损的干细胞制剂均有重要的现实意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种组合物、制剂及其用途。该制剂充分利用干细胞的增殖分化能力、玻尿酸和透明质酸钠的保湿以及EGF的促进细胞生长作用，达到稳定高效的修复面孔缺损问题。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种组合物，包括脐带间充质干细胞、生长因子、透明质酸或其盐。

在本发明的一些具体实施方案中，组合物还包括玻尿酸。

在本发明的一些具体实施方案中，以mg/mL计，所述生长因子在所述组合物中的质量体积比为1.5～2.5:1。

在本发明的一些具体实施方案中，以cell/mL计，所述脐带间充质干细胞在所述组合物中的密度为5×10⁵。

在本发明的一些具体实施方案中，所述透明质酸盐为透明质酸钠，所述透明质酸钠在所述组合物的中质量百分含量为5％～10％。

在本发明的一些具体实施方案中，所述透明质酸或所述玻尿酸在所述组合物的中质量百分含量为10％～20％。

在本发明的一些具体实施方案中，所述脐带间充质干细胞的制备方法包括如下步骤：

步骤1：取脐带清洗后，剥去动、静脉管和外膜，剪碎成1-2mm2小块，倒置培养；

步骤2：加入完全培养基培养，2～3d后半量换液，培养6～8d，待细胞从组织块中爬出，弃去组织块继续培养；所述完全培养基包括X-VIVO15无血清培养基和10ng/ml的EGF；

步骤3：待细胞生长至80％融合，弃去培养液，清洗，经0.25％胰酶消化1-2min，终止消化，400g离心5min，收集细胞；

步骤4：在步骤3获得的细胞中加所述完全培养基重悬，传代培养，收集P2或P3代细胞。

具体的，在本发明的另一些实施方案中，所述脐带间充质干细胞的制备方法包括如下步骤：

1.取脐带一根，PBS+200U/m的双抗溶液冲洗3遍；

2.脐带剪成2cm长小段，剥去动、静脉管和外膜，中间华氏胶剪碎成1-2mm²小块，均匀贴附于10cm培养皿，37℃5％CO2培养箱内倒放1-2h；

3.加入完全培养基(X-VIVO15无血清培养基+10ng/ml的EGF)5ml，2-3天后半量换液，培养6-8天，待细胞从组织块中爬出，弃去组织块继续培养；

4.带生长至80％融合，倒去培养液，PBS清洗一遍，加0.25％胰酶消化1-2min，加FBS终止消化，收集细胞400g离心5min；

5.加完全培养基重悬，根据计数结果接种2-3皿；

6.待细胞生长至80％融合后继续传代。取P2和P3代细胞上清液、P2或P3代细胞进行制剂的制备。

在本发明的一些具体实施方案中，所述生长因子的制备方法包括：

步骤1：取脐带清洗后，剥去动、静脉管和外膜，剪碎成1-2mm2小块，倒置培养；

步骤2：加入完全培养基培养，2～3d后半量换液，培养6～8d，待细胞从组织块中爬出，弃去组织块继续培养；所述完全培养基包括X-VIVO15无血清培养基和10ng/ml的EGF；