[发明专利]细胞分析方法

说明书

本发明提供细胞分析方法，其包括：(a)对于从用醛固定、在非水溶性的包埋介质中包埋的组织标本得到的样品实施所述包埋介质的除去处理而得到样品的步骤、(b)将步骤(a)中得到的样品在2元羧酸化合物的存在下进行热处理，得到样品的步骤、(c)使步骤(b)中得到的样品与具有细胞分散活性的酶接触，得到将步骤(b)中得到的样品中所含的多个细胞分离为单个细胞而分散到溶剂中的样品的步骤、(d)由所述流式细胞仪取得步骤(c)中得到的样品中的细胞来源的光学信息的步骤、及(e)基于步骤(d)中取得的光学信息，分析细胞的步骤。

【技术领域】

本发明涉及细胞分析方法。再具体而言，本发明涉及对于用醛固定，在非水溶性的包埋介质中包埋的组织标本中所含的构成肿瘤组织、非肿瘤病变组织、正常组织等的细胞进行分析适宜的细胞分析方法。

【背景技术】

以往、在构成实体瘤的组织(肿瘤组织)、非肿瘤病变组织、正常组织等的组织的细胞群的群解析中，使用从活着的组织分离为单个细胞而得到的样品。但是，从活着的组织得到的细胞是，所述细胞的状态容易发生偏差，品质管理较难。另外，在上述解析中，将组织中的细胞分离为单个细胞时需要长的时间。因此，仅在3维结构下保持的单个细胞的原本的特征变化或消失。

从而，有人建议将组织进行福尔马林固定石蜡包埋(以下，称为“FFPE”)而先保存3维结构下的细胞的原本的特征之后，再分离为单个细胞而分析的方法(例如，参照非专利文献1)。

在非专利文献1中公开了，在利用流式细胞仪的细胞的分析中，在从FFPE组织标本得到单一细胞时，在含柠檬酸的溶液中，对于FFPE组织标本的薄切切片进行热处理。

【非专利文献1】Willem E Corver等，“高分解能多参数DNA流式细胞术使得石蜡包埋组织中的肿瘤及间质细胞的细胞集团的检测成为可能(High-resolution multi-parameter DNA flow cytometry enables detection of tumour and stromal cellsubpopulations in paraffin-embedded tissues)”、The Journal of Pathology、2005年4月11日在线公开(http://interscience.wiley.com)、第206卷、pp.233-241

但是，本发明人发现，如在非专利文献1中记载的一样，除去组织标本的包埋介质之后，在含柠檬酸的溶液中进行热处理时，在用流式细胞仪分析的样品中，残留了不分离为单个细胞的多个细胞块，从而难以进行高精度细胞分析。

本发明是鉴于上述以往技术的实情而进行的，旨在提供可使用流式细胞仪，高精度分析组织中所含的细胞的细胞分析方法。

【发明概述】

本发明的范围仅由随附的权利要求定义，不受此发明概述部分的任何影响。

从而，本发明提供使用流式细胞仪对从用醛固定、在非水溶性的包埋介质中包埋的组织标本得到的细胞进行分析的细胞分析方法，其包括：

(a)通过对上述从用醛固定、在非水溶性的包埋介质中包埋的组织标本得到的样品实施上述包埋介质的除去处理，得到含组织、且上述包埋介质被除去的样品的步骤、

(b)通过对上述步骤(a)中得到的样品在2元羧酸化合物的存在下进行热处理，得到含组织的经热处理的样品的步骤、

(c)使上述步骤(b)中得到的样品和具有细胞分散活性的酶接触，将上述步骤(b)中得到的样品中所含的多个细胞分离为单个细胞而分散到溶剂中的步骤、

(d)由上述流式细胞仪取得上述步骤(c)中得到的样品中的细胞来源的光学信息的步骤、及

(e)基于上述步骤(d)中取得的光学信息，分析细胞的步骤。