[发明专利]单克隆抗体的纯化工艺

权利要求书

1.一种用于从细胞培养物中纯化单克隆抗体的方法，包括以下顺次的步骤：

(a)亲合层析，

(b)疏水相互作用层析，可选的随后的其它合适的纯化步骤。

2.根据权利要求1所述的方法，其中亲和层析基质选自蛋白A、蛋白G和蛋白L。

3.根据权利要求1所述的方法，其中亲和层析基质是蛋白A。

4.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(a)包括：在用于结合的合适pH和/或电导系数，将含有期望抗体的粗制混合物加载至柱，随后在所述期望抗体以单峰形式洗脱之前进行柱冲洗。

5.根据权利要求4所述的方法，其中柱冲洗包括：

(i)在合适的pH和/或电导率利用平衡缓冲液的第一冲洗，

(ii)在与所述第一冲洗缓冲液相同的pH和/或比所述第一冲洗缓冲液更高的电导率的第二冲洗，

(iii)在低于所述第二冲洗缓冲液的pH和/或电导率的第三冲洗，

(iv)在比所述第三冲洗缓冲液更低的pH和/或更高的电导率的抗体洗脱。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述柱冲洗包括：

(i)在约pH7.4和/或在1mS/cm至30mS/cm范围内的电导率利用平衡缓冲液的第一冲洗，

(ii)在约pH7.4和/或大于30mS/cm的电导率的第二冲洗，

(iii)在pH5至pH6.5范围内的pH和/或在1mS/cm至5mS/cm范围内的电导率的第三冲洗，

(iv)在约pH3.5和/或高于5mS/cm的电导率的抗体洗脱。

7.根据权利要求5所述的方法，其中缓冲液组分选自Tris、醋酸盐和柠檬酸盐缓冲液。

8.根据权利要求5所述的方法，其中在范围从约pH3.5至pH4、优选3.5至3.7的pH进行抗体洗脱。

9.根据权利要求5所述的方法，其中在所述缓冲液中利用添加剂进行洗脱，所述添加剂如氯化钠、精氨酸、甘氨酸，优选氯化钠。

10.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(a)之后的抗体制剂中聚集体的量不大于5％，优选不大于2％。

11.根据权利要求1所述的方法，其中在pH5至pH7范围内的pH和/或大于100mS/cm的电导率进行步骤(b)。

12.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤(b)中利用梯度降低的盐浓度从柱中洗脱抗体。

13.根据权利要求12所述的方法，其中盐选自硫酸铵、氯化钠、氯化铵和硫酸钠，优选硫酸铵。

14.根据权利要求1所述的方法，其中疏水柱基质选自苯基琼脂糖凝胶、丁基琼脂糖凝胶、辛基琼脂糖凝胶，优选苯基琼脂糖凝胶。

15.一种用于从细胞培养物中纯化单克隆抗体的方法，包括以下步骤：

(a)蛋白A亲和层析

(b)疏水相互作用层析

(c)离子交换层析

其中步骤(b)和步骤(c)可以以任何顺序进行。

16.根据权利要求15所述的方法，其中根据权利要求2-10所述进行步骤(a)。

17.根据权利要求15所述的方法，其中根据权利要求11-13所述进行步骤(b)。

18.根据权利要求15所述的方法，其中所述离子交换层析选自阳离子交换层析和阴离子交换层析。

19.根据权利要求18所述的方法，其中离子交换层析是阴离子交换层析。

20.根据权利要求15所述的方法，其中用于阴离子交换层析的柱基质选自DEAE琼脂糖凝胶、MonoQ和Q琼脂糖凝胶XL。

21.根据权利要求20所述的方法，其中柱基质是Q琼脂糖凝胶。

22.根据权利要求15所述的方法，其中以流动-通过-和-冲洗模式或结合-洗脱模式进行在步骤(c)的抗体洗脱。