[发明专利]一种人体血清miRNA的提取方法

权利要求书

1.一种人体血清miRNA的提取方法，其特征在于包括以下步骤：（1）人体血清的制备，使用血清采集管采集静脉空腹血，颠倒混匀后，于30-38℃温浴10-30min，室温2000-5000rpm离心3-10min；（2）人体血清的预处理，取步骤（1）制得的人体血清，添加灭菌的体积浓度为0.1%的焦炭酸二乙酯水溶液，并混合均匀，其中人体血清与焦炭酸二乙酯水溶液的体积配比为1:1-10；（3）人体血清miRNA的提取，向步骤（2）预处理的人体血清中加入等体积的Trizol，室温放置5min后，加入1/5 Trizol体积的氯仿，剧烈震荡并室温放置2-3min后，4℃ 12000×g离心15min，取上清液至新的离心管中，加入1/2 Trizol体积的异丙醇以沉淀RNA，并于-20℃放置0.5-12h后于4℃ 12000×g离心10min，然后倒掉上清，加入与Trizol等体积的体积浓度为75%的乙醇洗涤沉淀，4℃ 7500×g离心5min后倒掉上清，4℃ 12000×g离心2min，将残留乙醇用吸头除尽，并于室温放置使乙醇彻底挥发，然后用灭菌的体积浓度为0.1%的焦炭酸二乙酯水溶液于55-60℃温浴15min充分溶解RNA，用于检测纯度和含量，并经反转录后用于qRT-PCR检测。