[发明专利]巨细胞病毒蛋白的复合物

说明书

本申请要求2012年7月6日提交的美国临时申请第61/668,975号和2013年2月27日提交的美国临时申请第61/770,257号的权益，上述各文献的全部内容均通过引用纳入本文以用于所有目的。

技术领域

本发明的技术领域是针对人巨细胞病毒(HCMV)的疫苗，且具体是对纯化的复合物进行分离，所述复合物包含gH、gL和至少一种其他HCMV糖蛋白，优选是三聚体gH/gL/gO复合物或五聚体gH/gL/pUL128/pUL130/pUL131A复合物，以及其在疫苗中的后续用途。

背景技术

巨细胞病毒(CMV)是属于被称作疱疹病毒科或疱疹病毒的病毒科的病毒属。感染人的该物种通常称作HCMV或人疱疹病毒-5(HHV-5)。在疱疹病毒科中，HCMV属于β疱疹病毒亚科，其还包括来自其他哺乳动物的巨细胞病毒。

虽然在全身各处都有发现，但HCMV感染通常与唾液腺相关。HCMV感染了美国50％至80％的成年人(全世界的40％)，如大量普通人群中存在的抗体所示。在健康的人中HCMV感染通常是未被发现的，但对于免疫功能低下者(如感染HIV的人、器官移植接受者或新生婴儿)而言可以是致命的(Mocarski、Shenk和Pass 2006)。HCMV是最频繁地传播给发育中的胎儿的病毒。感染后，HCMV能够在体内维持潜伏状态，伴随宿主终生，伴随偶尔地由潜伏状态再激活。

HCMV似乎在之后的生命中对免疫参数具有重大影响并导致发病率和最终的死亡率增加(Simanek等(2011))。

迄今为止，已对超过20种不同HCMV毒株的基因组进行了测序，包括实验室毒株和临床毒株。例如，已对以下HCMV毒株进行了测序：Towne(GI:239909366)、AD169(GI:219879600)、Toledo(GI:290564358)和Merlin(GI:155573956)。HCMV毒株AD169、Towne和Merlin可获自美国典型培养物保藏中心(分别是ATCC VR538、ATCC VR977和ATCC VR1590)。

HCMV含有未知数目的膜蛋白复合体。在病毒包衣中的约30种已知糖蛋白中，已发现gH和gL具有特别的吸引力，原因在于其存在于数种不同的复合物中：二聚体gH/gL、三聚体gH/gL/gO(也称作gCIII复合物)和五聚体gH/gL/pUL128/pUL130/pUL131A(后一种蛋白也称作pUL131)。HCMV被认为使用五聚体复合物通过胞吞作用和低pH依赖的融合进入上皮和内皮细胞，但其被认为在涉及gH/gL或可能涉及gH/gL/gO的过程中在质膜处通过直接融合进入成纤维细胞。gH/gL和/或gH/gL/gO复合物足以感染成纤维细胞，但需要五聚体来感染内皮和上皮细胞(Ryckman、Rainish等，2008)。

Genini等(2011)公开了在初次和再激活的HCMV感染中对HCMV的五聚体复合物作出应答的血清抗体。该应答通过使用固定或裂解的上皮(ARPE-19)细胞的间接免疫荧光(IFA)和ELISA确定，其中使用一种或多种腺病毒载体(各携带一个HCMV基因)和平行地使用对照腺病毒载体感染所述细胞。通过识别复合物的两种、三种或四种蛋白的人中和单克隆抗体的反应性确定结果的特异性。在初次感染的14个病例中，在感染开始的2-4周内可稳定地检测到IgG抗体血清转换为UL128–131基因产物，同时抗体持续至少12个月。IgG抗体对UL128–131基因产物的应答通常优于对gH的应答并似乎在中和抗体应答之后(如上皮细胞中所测定的那样)。在再激活感染中，抗体应答显示出的趋势令人联想到加强应答。在HCMV血清阳性健康成年对照中检测到了IgG抗体，但在HCMV血清阴性个体中未检测到。

Kinzler等(2002)使用重组杆状病毒在昆虫细胞中共表达了gH、gL和gO，但无法生产gH/gL/gO三联复合物。而是仅检测到了gH/gL异源二聚体、gH/gL异源多聚体和gO同源多聚体。相反地，哺乳动物细胞中gH、gL和gO的共表达产生了与HCMV感染的细胞中形成的gH/gL/gO复合物非常类似的高分子量复合物。细胞表面免疫荧光显示这些复合物在被感染的细胞表面表达并显示。