[发明专利]一种利用胶体金免疫层析技术定量检测血清胃蛋白酶原的试纸条及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种筛查胃部疾病的试剂，尤其涉及一种利用胶体金免疫层析技术并通过定量检测人血清胃蛋白酶原I及胃蛋白酶原II的含量来筛查及疗效评估的胃相关疾病及早期胃癌的试纸条，属于胃病或早期胃癌的快速筛查及疗效评估领域。 

背景技术

胃癌是全球高危死亡率的第二大疾病，严重威胁着人类健康。胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，死亡率居各种恶性肿瘤前列，全球每年934,000新发胃癌病例，42%（近40万）的新发病例数在我国，胃癌在我国的患病率和死亡率均是世界水平的2倍多。其早期诊断、早期治疗是提高患者生存质量、降低死亡率的唯一途径，改善胃癌患者预后的关键是作好二级预防，血清胃蛋白酶原检测可以作为胃癌筛查“二步法”中的初筛方法。联合测定胃蛋白酶原I（PGＩ）和胃蛋白酶原II（PGⅡ）的水平及其比值可起到胃黏膜“血清学活检”的作用，有利于胃癌的预防干预、早期诊断以及术后复发预测。近年来，血清PG含量的变化与胃癌及其他胃部疾病的关系及其作为初筛手段在胃癌筛查中的应用已引起越来越多研究者的关注。 

人胃黏膜可分泌两种胃蛋白酶原（PG），即PGⅠ和PGⅡ，它们都是胃蛋白酶的前体。通常情况下，大部分进入胃腔内，在酸性条件下水解为胃蛋白酶参与蛋白的分解；约有1%PG通过胃粘膜毛细管进入血循环，进入血循环的PG在血液中非常稳定，血清PG水平可反映不同部位胃粘膜的形态和功能。血清PGI和PGII检测在胃部疾病或早期胃癌的筛查、胃部疾病疗效的评价及健康人群胃功能动态检测方面都具有重要意义。 

目前临床胃部疾病及胃癌的检测方法主要包括内窥镜、B超、放射学检测（X线）、肿瘤标志物等。X线作为传统的胃癌检测手段，对进展期胃癌或弥散型胃癌更有诊断价值，但此法存在射线暴露，检查费用较高等问题，因而对早期胃癌的判定显得无能为力；内窥镜费用较高，对操作人员的技术要求高，而且下胃镜又令患者很痛苦，结果使不少患者望而却步，对亚临床症状患者尚不能作为普查手段；与胃 癌有关的肿瘤标志物对于普通胃病及早期胃癌的诊断价值不大。 

相比与其他胃部检测手段，血清PGI/PGII联合检测具有无创伤、简便、可靠和费用低廉等优点，目前已建立多种检测方法，如酶联免疫法、化学发光法、免疫比浊法、时间分辨等，并且已在医院和体检中心广泛使用，但是往往需要昂贵的仪器和试剂，或检测结果不能立等可取以及不适于单人份测试。 

免疫金标记技术（Immunogold labeling technique）是出现于80年代初期的一种独特的免疫分析方式，主要利用了金颗粒具有高电子密度的特征，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中，这种方法由于快速、简便、准确和无污染等优点，在检测抗原、抗体中得到广泛使用。 

目前，在国内销售的免疫金标记技术的产品已有很多，但利用此检测方法定量检测血清胃蛋白酶原的产品尚属空白。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题之一是克服常规胃蛋白酶原检测方法不适合单人份测试、检测时间较长、检测成本高等缺点，提供一种快速、简便、准确、价格低廉的定量检测PG的方法。 

该方法所基于的免疫学原理是双抗体夹心法。样品加入样品吸收垫，样品中的液体首先溶解胶体金垫中含有的胶体金标记的鼠源性单克隆抗体。其次样品中待测抗原（PG）与胶体金颗粒标记的鼠源性单克隆抗体结合，形成抗原-抗体*胶体金复合物，并靠毛细作用向检测线移动。在硝酸纤维薄膜的检测线上固定有另一鼠源性单克隆二抗。当样品层析至检测线时，可以进一步形成抗体-抗原-抗体*胶体金双抗体夹心复合物，并在检测线（T线）上聚积显现出一条可见的显色反应。胶体金的量反应了待测抗原的量。从加样垫中泳动过来的过量胶体金标记的单克隆抗体，均可被固定于标准的胃蛋白酶原抗原（质控线，C线）所捕获，形成显色反应，这种显色反应，既代表了整个反应体系是正确的，同时T线显色反应的深浅，与检测区中被测抗原的量呈对应关系。胶体金颗粒在特定波长下，对光的吸收和散射与胶体金颗粒的量相关，通过光电感应器检测胶体金颗粒对光的吸收和散射，它与样本中的胃蛋白酶原的含量呈正比。 

为了达到以上所述的目的，本发明所采用的技术手段为：